综述：用于调节性T细胞疗法的试验性新药申请的非临床监管考量

《Frontiers in Medicine》：Nonclinical regulatory considerations for investigational new drug applications for regulatory T cell therapies

Treg细胞疗法在免疫相关疾病治疗中潜力显著，但面临监管挑战与非临床开发难点，需关注药效学、靶点特异性评估、安全性与生物分布研究，并加强与FDA等机构的互动以优化IND申请策略。

　　自2017年美国食品药品监督管理局（FDA）批准了首款嵌合抗原受体（CAR）T细胞疗法以来，基于细胞的治疗方法迅速扩展，不仅在治疗类型上多样化，还拓展到了除肿瘤学以外的其他疾病领域。特别是在自身免疫性疾病和炎症性疾病的治疗方面，调节性T细胞（Treg）疗法的研发数量持续增长。Treg细胞在维持免疫稳态中发挥着关键作用，能够抑制过度的免疫反应，防止自身免疫疾病的发生，并调控炎症反应。因此，Treg细胞疗法在治疗免疫介导疾病方面具有广阔前景。然而，这类疗法的开发路径需要严格遵循监管要求，确保其在安全性、纯度、效力和有效性方面均达到高标准，才能进入人体临床试验阶段。

在非临床开发过程中，Treg细胞疗法的评估涵盖了多个方面，包括药效学、药代动力学、安全性等。由于Treg细胞具有独特的生物学特性，其非临床研究的挑战性较大。传统的生物制品和CAR-T细胞疗法的监管指南在一定程度上可以为Treg细胞疗法的开发提供参考，但由于缺乏专门针对Treg细胞的指导文件，加上适用的非临床模型较为有限，这给药物开发者带来了诸多监管上的难题。为了克服这些挑战，研究人员和企业需要在非临床研究中采用更加科学和系统的方法，以确保所获得的数据能够有效支持后续的临床试验。

首先，药效学的评估是Treg细胞疗法开发的重要组成部分。由于Treg细胞本身具有免疫抑制功能，其在非临床模型中的有效性通常通过体外实验来验证。这些实验可以评估Treg细胞对特定炎症过程的抑制能力，以及其对疾病相关生物标志物的影响。体外研究的结果结合文献中关于CAR或TCR靶点在疾病机制中的重要性，可以为Treg细胞疗法的临床应用提供科学依据。此外，针对不同疾病模型，如移植物抗宿主病（GvHD）模型，研究人员可以使用免疫缺陷小鼠，并移植人类外周血单核细胞（PBMC），以模拟人体免疫系统，从而评估Treg细胞的总体抗炎效果。

然而，由于Treg细胞疗法的复杂性，设计合适的体外模型和实验方案变得尤为关键。例如，对于CAR-Treg或TCR-Treg疗法，需要考虑其靶向配体在不同物种中的表达情况，以及是否能够被非临床模型准确识别。由于Treg细胞疗法通常不依赖于广泛的细胞分布，因此在非临床研究中，可能不需要进行复杂的药代动力学评估。然而，对于某些特定的疾病模型，如神经系统疾病，研究人员可能需要评估Treg细胞是否能够有效穿过血脑屏障，并在靶器官中发挥作用。这种评估可以通过非临床动物模型来实现，但需要充分考虑物种特异性的问题。

在安全性评估方面，Treg细胞疗法与传统的效应T细胞疗法存在显著差异。由于Treg细胞的主要功能是抑制免疫反应，其潜在的安全风险也有所不同。例如，Treg细胞可能会在体内发生不受控制的增殖，从而增加癌变的风险；或者在某些情况下，其免疫抑制功能可能过度，导致免疫系统功能失调。此外，Treg细胞可能在某些组织中表达不当的靶点，从而影响其疗效或引发副作用。因此，在非临床研究中，需要对这些潜在风险进行系统分析，并通过多种实验手段加以验证。

为了更全面地评估Treg细胞疗法的安全性，研究人员通常会采用体外和体内实验相结合的方式。体外实验可以评估Treg细胞对靶组织的毒性，以及其是否能够独立于细胞因子（如IL-2）进行增殖。此外，还可以通过分析细胞克隆性，判断是否存在主导克隆的形成，以及对其他产品成分（如基因编辑或修饰的T细胞）进行安全性评估。在体内实验中，研究人员可能会使用免疫缺陷动物模型，以减少移植物抗宿主病（GvHD）的发生，并评估Treg细胞在体内的持久性和分布情况。然而，由于体内模型的复杂性，这些实验通常只能提供有限的信息，因此需要谨慎设计和解释。

在非临床研究中，遗传毒性评估也是不可忽视的一部分。对于使用现代整合型病毒载体（如慢病毒）生产的Treg细胞疗法，遗传毒性评估通常集中在整合位点的分析上，以确认其是否避免了靠近潜在致癌基因的区域。而对于采用基因编辑技术生产的Treg细胞疗法，可能需要进行更全面的遗传毒性评估，包括对基因编辑过程可能引发的脱靶效应进行分析。此外，免疫原性评估也是非临床研究的重要环节，因为Treg细胞可能引发宿主免疫反应，从而影响其疗效或安全性。因此，研究人员需要评估Treg细胞及其修饰成分是否可能在体内产生免疫反应，并通过非临床模型预测其在人体中的潜在风险。

在非临床研究的文档准备方面，研究人员需要确保提交的数据和报告符合监管机构的要求。例如，美国FDA的《非临床评估指南》要求提交的非临床研究数据应包括详细的实验报告、数据汇总和总体策略说明。这些文档不仅需要展示实验的设计和结果，还需要提供足够的背景信息，以便监管机构能够全面理解研究的科学依据和实验目的。此外，研究者还需要关注数据的标准化格式，例如FDA的SEND格式，以确保数据的可读性和一致性。对于某些特定类型的实验，如单次和重复剂量毒性研究、致癌性研究以及体内遗传毒性研究，SEND格式的数据提交可能是强制性的。

为了提高非临床研究的效率和科学性，研究人员还需要与监管机构保持密切沟通。例如，FDA的INTERACT（初始针对性监管咨询）和Pre-IND（临床前新药申请）会议为药物开发者提供了与监管机构交流的机会，以获取反馈和指导。这些会议可以帮助研究人员更好地理解监管机构对非临床研究的期望，并优化研究设计和数据提交策略。在准备这些会议时，研究人员需要确保提交的信息质量，包括CMC（化学、制造和控制）数据、临床前研究数据以及患者人群的相关信息，以便监管机构能够全面评估药物的安全性和有效性。

在临床试验剂量选择方面，Treg细胞疗法与传统的小分子药物存在显著差异。由于Treg细胞在体内可以增殖，其临床起始剂量通常不是由动物实验结果直接决定的，而是参考类似或类比产品的临床研究数据。因此，在非临床研究中，研究人员需要关注如何通过体外和体内实验来支持剂量选择，例如通过评估Treg细胞的药效学特性、毒理学表现以及对不同靶点的反应情况。此外，还需要考虑Treg细胞的稳定性、持久性和安全性，以确保其在人体中的应用不会引发不良反应或免疫排斥等问题。

总体而言，Treg细胞疗法的非临床开发是一个复杂且多方面的过程，需要综合考虑药效学、安全性、剂量选择以及监管文档的准备等多个方面。研究人员和企业需要在非临床研究中采用科学、系统的方法，确保所获得的数据能够支持后续的临床试验，并最终实现药物的监管批准。同时，与监管机构的沟通和合作也是确保非临床研究顺利进行的重要环节，可以帮助研究人员更好地理解监管要求，并优化研究设计和数据提交策略。