原发性干燥综合征中hsa-miR-661的异常表达及其通过circRNA_0008301/miR-661/TOLLIP轴调控疾病活动的机制研究

《Clinical Rheumatology》：Analyzing the expression of hsa-miR-661 in peripheral blood mononuclear cells of patients with primary Sj?gren's syndrome and its clinical significance

本研究针对原发性干燥综合征(pSS)缺乏高效诊断标志物及发病机制不清的问题，开展了hsa-miR-661在pSS患者外周血单个核细胞中表达特征及临床意义的探索。通过qRT-PCR检测发现hsa-miR-661在pSS组显著上调，且与疾病持续时间、低补体C3、血小板减少及高ESSDAI评分显著相关；双荧光素酶报告基因实验验证了hsa_circ_0008301/miR-661/TOLLIP调控轴的存在。结果表明hsa-miR-661可作为pSS潜在诊断标志物（AUC=0.892）及疾病活动度评估指标，为pSS的分子机制研究和靶向治疗提供了新方向。

　　

当我们的身体免疫系统突然"倒戈相向"，将攻击矛头指向自身组织时，一种名为原发性干燥综合征(pSS)的自身免疫疾病便悄然发生。患者不仅常年忍受口干眼燥的困扰，更可能伴随全身多器官损伤。尽管医学界已认识到免疫失调是核心发病机制，但精准诊断标志物的缺乏和治疗靶点的模糊，使得临床管理面临巨大挑战。在这一背景下，微小RNA(miRNA)作为基因表达的"精细调控器"，为破解pSS的分子密码提供了新视角。

以往研究发现，miRNA在类风湿关节炎、系统性红斑狼疮等自身免疫病中扮演重要角色，但在pSS中的研究仍相对有限。特别是一种名为hsa-miR-661的分子，虽在多种癌症中被证实与肿瘤进展相关，但其在自身免疫疾病中的功能却鲜为人知。这促使研究人员思考：hsa-miR-661是否也参与了pSS的发病过程？其表达水平能否反映疾病严重程度？更重要的是，它是否可能成为新的诊断工具和治疗靶点？

为了回答这些问题，张小雨、王锐等研究人员在《Clinical Rheumatology》上发表了最新研究成果。他们从宁夏医科大学总医院招募了58例pSS患者和58例健康对照，采用定量实时PCR(qRT-PCR)技术检测外周血单个核细胞(PBMCs)中hsa-miR-661的表达水平，并系统分析其与临床症状、实验室指标及疾病活动度(ESSDAI评分)的关联。通过生物信息学预测和双荧光素酶报告实验，进一步验证了hsa-miR-661与circRNA_0008301和TOLLIP基因之间的直接调控关系。

关键技术方法包括：1）基于医院队列的病例-对照研究设计（58例pSS患者与58例健康对照）；2）qRT-PCR检测miRNA表达；3）双荧光素酶报告基因实验验证分子相互作用；4）受试者工作特征(ROC)曲线评估诊断效能；5）统计学分析采用t检验、χ2检验、Spearman相关和Logistic回归等方法。

Upregulation of hsa-miR-661 in pSS and its clinical associations

研究发现pSS患者外周血单个核细胞中hsa-miR-661表达显著高于健康对照组(P<0.0001)。按中位表达水平分组后，高表达组患者更易出现病程≥10年、补体C3降低、血小板减少和血沉(ESR)升高的情况。特别值得注意的是，hsa-miR-661水平与口干严重程度(VAS评分)呈正相关(r=0.395, P=0.002)，而与干眼症状无显著关联。

Correlation between hsa-miR-661 expression and ESSDAI scores

将患者按ESSDAI评分分组后，高疾病活动度(ESSDAI≥14)组患者显示出更高的hsa-miR-661表达水平(P<0.05)。相关性分析进一步证实hsa-miR-661与ESSDAI评分呈正相关(r=0.400, P=0.002)，表明其可作为评估pSS疾病活动度的潜在生物标志物。

Validation of circRNA_0008301 and TOLLIP direct targets of hsa-miR-661

研究人员通过生物信息学预测发现hsa_circ_0008301与hsa-miR-661存在互补结合位点。双荧光素酶报告实验证实，野生型hsa_circ_0008301与hsa-miR-661共转染可显著抑制荧光素酶活性，而突变型则无此效应。同时，实验验证了TOLLIP是hsa-miR-661的直接靶基因，野生型TOLLIP 3'非翻译区(3'-UTR)与hsa-miR-661共转染后荧光素酶活性显著抑制，提示存在circRNA_0008301/miR-661/TOLLIP调控轴。

Diagnostic utility of hsa-miR-661 for pSS and disease activity stratification

ROC曲线分析显示，hsa-miR-661区分pSS患者与健康对照的曲线下面积(AUC)达0.892，敏感性和特异性分别为82.8%和77.6%。在区分疾病活动度方面，其AUC为0.799，敏感性87.5%，特异性64.0%，表明hsa-miR-661在pSS诊断和疾病活动度评估中均具有良好的应用价值。

研究结论表明，hsa-miR-661在pSS患者中显著上调，且与疾病持续时间、补体C3水平、血小板计数、ESR、口干严重程度和ESSDAI评分等关键临床指标密切相关。分子机制研究揭示了一个新的circRNA_0008301/miR-661/TOLLIP调控轴，其中hsa-miR-661可能通过靶向抑制TOLLIP（一种重要的Toll样受体信号负调控因子），导致免疫反应过度激活，从而参与pSS的发病过程。

这项研究的科学意义在于首次系统阐明了hsa-miR-661在pSS中的表达特征和临床价值，不仅为pSS提供了潜在的诊断生物标志物，还揭示了新的分子调控机制。未来通过更大规模的多中心研究验证这些发现，并深入探索调控轴的具体功能，可能为pSS的精准诊断和靶向治疗开辟新的途径。