冻干介质对水牛精子受精能力的影响

《Cell and Tissue Banking》：The impact of lyophilization media on fertilization potential of buffalo spermatozoa

本研究通过彗星试验和ICSI技术，评估了四种 lyophilization 介质（1-4）对冷冻水牛精子生育力的影响。结果表明，TCM介质DNA损伤率最低（6.17%），胚胎发育率最高；而Tris-EDTA介质DNA损伤最严重（13.09%），EGTA/EDTA介质ICSI成功率最低。结论为TCM介质最优，适用于冷冻精子复苏。

　　

摘要

本研究的目的是探讨冻精的冻干保护介质对水牛精子生育能力的影响，通过彗星实验（comet assay）和单精子注射（ICSI）技术进行评估。精液样本在700×g的离心力下使用Percoll梯度（45–90%）离心20分钟，然后用Tyrode’s Albumin Lactate Pyruvate（TALP）缓冲液清洗两次，并分别稀释到不同的冻干保护介质（介质1、2、3和4）中。稀释后的精子细胞在液氮蒸汽中冷却，随后立即放入冻干机（温度-55°C，压力0.001 Mbar）中进行冻干。冻干完成后，精液样本在4°C下保存三个月。冻干后的精液在室温下用milli-Q水（100 μL）重新水化。彗星实验结果显示，TCM介质（中药保护介质）导致的DNA损伤率最低（6.17%），胚胎发育率最高；而Tris-EDTA介质导致的DNA损伤率最高（13.09%）。使用EGTA和EDTA介质进行ICSI时，成功率最低。由此可见，使用TCM介质对冻干精子进行ICSI能够获得最高的胚胎发育率，而Tris-EGTA和Tris-EDTA介质的成功率则较低。