生成一种三标签敲入小鼠模型，以可视化大脑发育过程中II型经典黏附蛋白的精确定位模式

《Genes to Cells》：Generation of a Triple Tag Knock-In Mouse to Visualize Precise Protein Localization Patterns for Type II Classic Cadherins During Brain Development

钙黏蛋白Cdh6和Cdh8在胚胎大脑发育中通过CRISPR/Cas9敲入技术验证其动态蛋白表达与亚细胞定位，发现其在中线隔区域和轴突中的生理积累，揭示类型II经典钙黏蛋白对脑区分隔的关键作用。

　　

摘要

经典的钙黏蛋白是具有自组织能力的细胞间黏附分子，在发育中的大脑区域和/或边界处对不同类型的细胞进行分离起着重要作用。然而，由于抗原性较低，小鼠胚胎大脑中每种钙黏蛋白亚类的蛋白质动态变化尚未得到充分研究。在这里，我们利用CRISPR/Cas9基因编辑技术生成了带有-HA和-PA标签的敲入（KI）小鼠，并培育出了^HA/HA、Cdh8>^PA/PA、Cdh11>^EGFP/EGFP三重标签的KI纯合小鼠，这些小鼠具有正常的生存能力和生育能力。使用特异性抗体进行免疫染色后，我们发现其蛋白质表达谱与胚胎大脑发育过程中通过原位杂交（ISH）获得的结果几乎一致。此外，在mRNA ISH阳性区域之外，尤其是在神经纤维束上，我们也检测到了显著的免疫染色信号，这表明这类II型钙黏蛋白在轴突上存在生理性积累。通过超分辨率成像技术，我们进一步研究了这些钙黏蛋白在室管膜边界（zona limitans intrathalamica）周围的亚细胞定位动态，证实E12.5时期前体节2/3区域的边界是由室管膜细胞的顶侧附着位点上的Cdh6或Cdh11所维持的。这些结果凸显了基因标签KI方法在研究低抗原性蛋白质方面的价值，以及II型经典钙黏蛋白在大脑发育中的功能性作用。

利益冲突

作者声明没有利益冲突。

数据可用性声明

本研究的数据可应合理请求向通讯作者索取。