青少年子宫内膜异位症血清microRNA生物标志物的鉴定及其临床意义

《Reproductive Biology and Endocrinology》：Identifying serum microRNAs as biomarkers for endometriosis in adolescents and young adults

本研究针对青少年子宫内膜异位症（EM）诊断延迟的临床难题，通过前瞻性队列研究，利用RNA测序技术首次系统鉴定了青少年EM患者血清中差异表达的microRNAs。研究发现22种microRNAs（4种上调，18种下调）可显著区分EM患者与对照组，其中11种为青少年特有标志物。该发现为开发无创诊断工具提供了新靶点，对实现早期干预具有重要意义。

　　

当花季少女们反复被难以启齿的慢性盆腔疼痛困扰时，背后可能隐藏着一种容易被忽视的疾病——子宫内膜异位症（Endometriosis, EM）。这种困扰全球1.9亿育龄妇女的常见妇科疾病，诊断过程却异常曲折。目前腹腔镜检查被视为确诊的"金标准"，但这种有创操作让许多年轻患者望而却步，导致诊断延迟平均长达8-10年，而在青少年群体中，这一延迟更是惊人地达到近14年。

更令人担忧的是，医学界对青少年子宫内膜异位症的认知存在明显不足。研究表明，65%因盆腔疼痛接受腹腔镜探查的青少年被发现患有子宫内膜异位症，而75%对治疗无效的慢性盆腔疼痛青少年患者也存在这一问题。多数成年患者回忆，他们的症状早在青少年时期就已出现。然而，青少年患者常常面临症状被忽视、误诊的困境，65.2%的青少年起病患者表示她们的痛苦没有被认真对待。

在这种背景下，寻找一种准确、无创的诊断方法成为当务之急。近年来，科学家们将目光投向了microRNA（微小RNA）——一类长度约22个核苷酸的小分子非编码RNA，它们能在体液中稳定存在，并参与基因表达的转录后调控。此前研究已在成年子宫内膜异位症患者中发现了一些有潜力的microRNA标志物，但青少年患者是否具有独特的分子特征仍属未知。青少年患者的疾病往往处于更早期阶段，可能需要不同的生物标志物进行识别。

为了解开这一谜团，由耶鲁大学医学院的Alla Vash-Margita和Ramanaiah Mamillapalli领导的研究团队在《生殖生物学与内分泌学》杂志上发表了一项开创性研究。他们首次将焦点对准青少年和年轻成人群体，试图揭示这一特定人群血清中microRNA的表达特征，为早期无创诊断提供新思路。

研究人员采用了一项前瞻性临床研究设计，在2018年至2021年间共招募了63名13-26岁的青少年和年轻成人患者。所有参与者均因盆腔疼痛或可疑盆腔病变计划接受妇科手术。通过严格的纳入排除标准，最终51名参与者被纳入分析，其中31名经手术或MRI证实为子宫内膜异位症（EM组），20名为无EM的其他妇科病变患者（对照组）。研究团队在手术当日采集血清样本，采用盲法进行microRNA表达分析，确保了结果的客观性。

关键技术方法包括：采集患者血清样本后，使用Qiagen miRNeasy Mini kit提取总RNA；通过Illumina NovaSeq平台进行小RNA测序；利用miRge3软件进行microRNA定量分析；采用DESeq2软件进行差异表达分析。

研究结果揭示了青少年子宫内膜异位症患者独特的分子特征：

差异表达的microRNA谱

RNA测序分析共检测到859种血清microRNAs存在差异表达，其中468种表达上调，391种表达下调。这一发现与成年患者的研究结果既有一致性又存在明显差异。研究人员特别关注那些表达差异显著、组间重叠少的microRNAs，最终确定了22种最具区分能力的标志物。

上调的microRNA标志物

研究发现4种显著上调的microRNAs：hsa-miR-501-5p（1.8倍）、hsa-miR-19b-3p（1.6倍）、hsa-miR-3940-3p（1.5倍）和hsa-miR-1255b-5p（1.4倍）。值得注意的是，除miR-19b-3p在成年EM相关不孕症中有过报道外，其余三种均为新发现的青少年特异性标志物。

下调的microRNA标志物

更为显著的是18种显著下调的microRNAs，包括hsa-miR-2116-5p、hsa-miR-455-3p、hsa-miR-4686等，其中部分分子如hsa-miR-7850-5p下调幅度高达32.4倍。在这18种microRNAs中，6种（miR-34c-5p、miR-204-5p、miR-21-3p、miR-451b-5p、miR-195-5p和miR-34a-5p）在成年EM患者中已有报道，而其余11种则为新发现的青少年特异性标志物。

与成年患者的比较

研究还发现，青少年与成年EM患者共享17种差异表达的microRNAs，包括Let-7家族多个成员（Let-7b-5p、Let-7a-5p等）以及miR-125b-5p、miR-150-5p、miR-342-3p等已知与EM相关的分子。这一发现表明青少年与成年EM存在共同的分子机制，同时又具有年龄特异性特征。

研究结论与讨论部分强调了这一发现的重大意义。青少年子宫内膜异位症的microRNA表达谱既与成年患者有重叠，又存在明显差异，这种差异可能反映了疾病的不同发展阶段或年龄相关的生理差异。研究鉴定的22种显著差异表达的microRNAs中，有14种是首次被发现与EM相关，其中11种为青少年特有，这为开发针对青少年人群的特异性诊断工具奠定了基础。

从临床转化角度，这些microRNA标志物有望发展成为无创血液检测方法，避免青少年患者因诊断目的而接受有创手术。早期诊断意味着可以更早开始有效治疗，可能阻止疾病进展，减少长期并发症。研究还提示，这些异常表达的microRNAs本身可能成为治疗靶点，通过使用模拟物或抑制剂调节其表达水平，为开发新的治疗方法提供方向。

然而，研究也存在一定局限性。样本量相对较小限制了按疾病分期进行分层分析的能力；研究对象主要来自同一地理区域且以白种人为主，可能影响结果的普适性；大多数参与者因疼痛管理使用激素类药物，可能对microRNA表达产生 confounding effect（混杂效应）；对照组包含各种附件包块患者，这些病变本身可能影响microRNA水平。

尽管如此，这项研究无疑为青少年子宫内膜异位症的诊断领域带来了新的希望。随着进一步大样本验证研究的开展，这种基于血清microRNA的无创诊断方法有望彻底改变青少年EM的诊断现状，让花季少女们早日摆脱疾病的困扰，迎接健康灿烂的青春。