《Scientific Reports》：Evaluation of in vitro liver models and non-human primates for predicting ADAR RNA editing efficiency in human liver
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首次系统比较13种人源体外肝模型与非人灵长类(NHP)体内编辑效率，证实PHH 3D球状体与NHP肝组织ACTB编辑高达70%，为EON候选物筛选提供黄金标准。
肝脏疾病每年夺走全球数百万生命，传统药物却常因模型失真在临床试验折戟。RNA疗法新星——ADAR酶介导的腺苷-肌苷(A→I)编辑，可像“分子修正带”般瞬时纠偏致病转录本，却苦于缺乏能真实预演人体反应的“试炼场”。为此，ProQR团队把目光投向能复刻肝脏天然编辑机器的多维模型，展开一场跨越培养皿与灵长类肝脏的“预测能力大考”。
研究首先对2D/3D的13种人源肝细胞体系进行“身份体检”：qPCR显示，PHH球状体、肝微组织(LMT)与HUH7、Hep3B的ADAR1表达最接近人肝；白蛋白分泌量上，3D PHH比2D提升17倍，证实结构重塑功能。随后，作者以 ubiquitous 的β-肌动蛋白基因ACTB为靶，比较裸EON与GalNAc缀合EON的编辑效率。结果呈现“模型-递送”双变量奇观：在癌症系HepG2中，GalNAc仅把1%的裸EON编辑提升至3%，而PHH单供体3D球状体中GalNAc-EON 7天即飙至69%，且与白蛋白分泌及ASGR1受体膜定位呈正相关(r=0.86)。时间梯度实验揭示，3D体系存在累积效应——LMT连续给药14天，裸EON编辑由12%升至37%。递送方式比拼中，同一100 nM剂量，LNP在PHH实现44%编辑，显著高于gymnosis(18%)与脂质转染(30%)。
当视线转向体内，4只雄性食蟹猴按2 mg/kg LNP-ACTB-EON静脉三剂给药，肝穿刺ddPCR给出62%-70%的编辑峰值，与体外PHH 250 nM LNP模型(≈76%)高度吻合，且肝内EON浓度达1 μM级，验证体外-体内剂量-效应可转化。综合毒性评估未见LDH或caspase异常，提示策略安全。
关键技术速览：采集商业人肝总RNA与13种细胞模型，采用dPCR定量ADAR1等基因；构建2D/3D PHH球状体、iPSC-肝细胞、LMT；以GalNAc或LNP(GenVoy-ILM)递送ACTB-EON；ddPCR、Sanger与NGS三法交叉测定A→I比例；PNA-杂交HPLC定量组织EON；ASGR1免疫荧光定位；雄性食蟹猴肝活检伦理实验。
结果分述如下：
“体外模型表征”——PHH 3D与LMT在ADAR1、CYP3A4、白蛋白转录本及GSEA肝基因富集度上最接近人肝，推荐为首选平台。
“ASGR1受体表征”——PHH球状体膜定位丰度最高，与GalNAc-EON增效直接相关；癌系HepG2虽RNA高表达，蛋白却困于胞质，解释其摄取低效。
“2D模型编辑能力”——IHH裸EON 12%拔得头筹，HepG2仅1%；GalNAc在癌系普遍“失灵”，但在PHH单供体升至56%，提示癌系膜交通缺陷。
“3D模型编辑能力”——PHH球状体GalNAc-EON 69%居首；LMT 44%；14天累积效应显著，证明3D架构延长编辑窗口。
“递送方式与检测”——LNP普遍优于转染与gymnosis；ddPCR略严谨但两法趋势一致，支持Sanger快速初筛。
“体外-体内转化”——NHP肝编辑62%-70%，与PHH 76.6%高度重叠，首次给出“体外250 nM LNP≈体内2 mg/kg”可换算标尺，为剂量预测提供依据。
结论与讨论指出：
ADAR表达并非限速，模型架构与受体膜定位才是决定编辑高度的“闸门”；
3D PHH球状体兼具生理相关性与高编辑，被确立为EON早期优选的“黄金模型”；
GalNAc增强呈背景依赖性，只有ASGR1正确循环至膜才显效；
LNP递送可跨越培养-物种壁垒，实现“体外数百纳摩—体内数微克”级线性外推；
多模型复合评分策略，将编辑效率、肝基因富集、毒性、药代纳入统一标尺，可显著提升临床成功率。
该研究终结了“用癌系猜肝脏”的粗犷时代，为RNA编辑疗法装上一把可量化的“转化钥匙”，其公开的NHP-PHH对应关系将成为行业剂量推算的共通坐标，加速肝病RNA编辑药物走向临床。
