Rubicon在血小板中的作用：促进血栓形成，但并非自噬抑制因子

《Blood Advances》：Role of Rubicon in Platelets: A Promoter of Thrombosis but Not an Autophagy Repressor

Rubicon蛋白在动脉血栓中独立于自噬途径调控血小板功能，表现为高剪切流下胶原结合能力下降及活化后磷脂酰丝氨酸外露受损。

　　

Hammodah R. Alfar | Elizabeth R. Driehaus | Alexis N. Smith | Danielle M. Coenen | Dlovan F. D. Mahmood | Jeremy P. Wood | Sidney W. Whiteheart

美国肯塔基大学分子与细胞生物化学系，列克星敦，KY

摘要

Rubicon（RUN结构域、与Beclin-1相互作用且富含半胱氨酸的蛋白质）是核细胞中自噬过程的负调控因子；然而，其在血小板中的作用尚未被研究。在本研究中，我们发现Rubicon在动脉血栓形成过程中具有独立于自噬的作用。敲除血小板/巨核细胞中Rubicon基因（RUBCN^-/-）的小鼠表现出正常的循环血小板计数，但血小板体积略有增大。与自噬相关的囊泡延长蛋白（如ATG5、ATG7、Syntaxin 17、LC3和Rab7）的基线水平未受影响，激活后血小板的信号传导通路也未发生异常。三种类型的血小板颗粒分泌功能均保持正常。这些小鼠对凝血酶、convulxin或botrocetin的聚集反应也未受影响。激活依赖性的自噬过程（如LC3或p62的丢失）也未出现异常。然而，在FeCl₃诱导的颈动脉损伤模型中，RUBCN^-/-小鼠表现出明显的血栓形成缺陷，但在尾部截断止血模型中则没有缺陷。通过微流控技术进一步证实了血小板本身的缺陷：在高剪切流条件下，RUBCN^-/-血小板的胶原结合能力降低，而在低剪切流条件下则无此现象。此外，凝血酶或convulxin激活后，RUBCN^-/-血小板表面的磷脂酰丝氨酸（PS）暴露减少，但参与PS暴露的anoctamin 6蛋白总量未受影响。血小板的内吞作用也未受影响，线粒体膜电位仅略有下降，凝血速度也略有延迟，这表明Rubicon可能参与血小板功能的后期阶段。综上所述，我们的研究结果表明，Rubicon以一种独立于经典自噬机制的方式促进血栓形成和促凝性血小板的生成。