针对阴道毛滴虫的敏感荧光PCR检测方法的临床评估

《Clínica e Investigación en Arteriosclerosis (English Edition)》：Clinical evaluation of a sensitive fluorescent PCR assay for trichomonas vaginalis

滴虫性阴道炎的荧光PCR检测方法研究显示其灵敏度达100%，特异性98%，显著优于显微镜检查（50%-60%）和培养法（75%-95%），且能有效减少假阴性。

　　

陶江|杨金波|聂波|彭家琦|周丽敏|吴浩|陈先英|陈杰|唐轩|杨福强|彭焕子|张天祖|李冰清|王金全|孙光辉|赵建中|夏建波|杜欣|谢小兵

长江大学附属荆州医院实验室医学系，中国荆州434020

摘要

滴虫病由阴道毛滴虫（T. vaginalis）引起，是一种常见的性传播疾病（STD），主要影响生殖道和泌尿道。滴虫病在全球范围内都有分布，在中国也广泛流行。近年来，由于复发性或持续性阴道毛滴虫病的比例持续增加，相关的临床诊断和治疗面临新的挑战。目前，临床诊断依赖于临床特征和实验室检测。通过显微镜检查阴道分泌物是一种常用的诊断方法，可以在阴道分泌物中观察到活跃的T. vaginalis。尽管显微镜检查具有高特异性，但其敏感性仅为50%–60%。因此，迫切需要开发出更敏感和准确的滴虫病临床诊断方法。本研究在湖北省妇幼保健医院、襄阳市第一人民医院、湖南中医药大学附属医院和荆州中心医院进行了T. vaginalis感染的临床诊断。采用了不同的方法——荧光PCR（F-PCR）、显微镜检查、测序和培养——来诊断T. vaginalis。F-PCR的敏感性、特异性、阳性预测值（PPV）、阴性预测值（NPV）、阴性似然比（NLR）和准确率分别为100%（98–100%）、98%（96%–99%）、97%（93%–98%）、100%（99%–100%）、0.00和99%（97%–100%）。与传统方法（如显微镜检查）相比，F-PCR具有更高的敏感性和准确性。此外，F-PCR的假阴性概率低于测序和培养方法。与显微镜检查、测序和培养方法相比，F-PCR显著降低了假阴性的概率，且更敏感、更准确，是一种强大的临床诊断工具。

引言

滴虫病是由T. vaginalis感染引起的，这种厌氧生物寄生于人体生殖泌尿系统[1]。它通过破坏上皮细胞并产生乳酸引起炎症，主要通过性传播途径传播。滴虫病是全球最常见的非病毒性性传播疾病之一[2]。根据世界卫生组织的数据，2020年全球15–49岁人群中约有1.56亿例T. vaginalis新发病例。在中国，过去10年中，15–49岁年轻人和中年人群中的滴虫病发病率有所上升。

T. vaginalis可能导致不良的生殖健康后果，包括宫颈病变；子宫切除术后残端蜂窝织炎或脓肿；盆腔炎；不孕症；对HIV感染的易感性增加[3,4]；以及宫颈癌风险增加，尤其是在T. vaginalis与HPV共感染的情况下。T. vaginalis还可能增加精神疾病的风险，尤其是在难治性T. vaginalis患者中。妊娠期间患有滴虫病的患者早产、胎膜早破、低出生体重、新生儿滴虫病和新生儿死亡的风险增加[5]。

临床实验室常用的T. vaginalis检测方法包括显微镜检查、培养、核酸扩增检测和抗原检测[6,7]。显微镜检查仍然是传统的首选诊断方法，但其敏感性较低（50%–60%），且容易产生假阴性结果。虽然T. vaginalis培养方法的特异性较高，但检测周期较长，操作相对复杂，需要高质量样本，且敏感性波动较大（75%–95%）。抗原检测方法的可重复性也较差，结果受标本采集者和采样工具等主观因素影响。相比之下，核酸扩增技术作为一种高灵敏度的检测方法，能够快速准确地检测T. vaginalis，具有高敏感性和高特异性，结果不易受人为解释等主观因素的影响。

目前，在T. vaginalis的分子诊断中主要使用两种类型的靶标：毛滴虫核糖体RNA序列和保守重复序列。保守重复序列作为靶标比核糖体RNA更敏感，因为它们的保守重复序列在基因组中的含量远高于核糖体基因[8,9,10,11,12]。本研究比较了针对保守重复序列的F-PCR与显微镜检查、测序和培养在检测T. vaginalis方面的敏感性和准确性。结果显示，F-PCR能够快速准确地诊断T. vaginalis》，其敏感性和特异性均高于传统的显微镜检查和培养方法。此外，F-PCR还可以减少显微镜检查中可能出现的主观解释误差，从而提高诊断结果的准确性和可靠性，为临床诊断提供可靠的工具。

样本收集

样本收集

共有507项临床试验在四家医院进行，其中120项在湖北省妇幼保健医院进行，130项在襄阳市第一人民医院进行，118项在湖南中医药大学第一附属医院进行，139项在荆州中心医院进行。实验方案均获得了伦理委员会的批准

F-PCR的检测范围

为了确定F-PCR的检测范围，使用含有500 bpT. vaginalis重复序列的标准质粒进行梯度稀释，并作为F-PCR的模板。如图S3所示，当标准质粒浓度在2.46×10²至2.46×10¹⁰拷贝/mL范围内时，模板浓度与循环阈值（Ct）之间存在良好的线性关系，R²=0.9983。这一结果表明F-PCR能够有效检测T. vaginalis样本

讨论

T. vaginalis感染是最常见的性传播疾病之一，全球约有1.8亿人感染。为了更准确地诊断和治疗这种疾病，迫切需要开发更敏感和特异的T. vaginalis检测方法。目前，中国的T. vaginalis诊断通常采用显微镜检查或培养方法。然而，这些方法存在一定的局限性；例如

CRediT作者贡献声明

陶江：撰写——原始稿件，方法学部分。杨金波：撰写——原始稿件，方法学部分。聂波：数据整理。彭家琦：数据整理。周丽敏：数据整理。吴浩：数据整理。陈先英：数据整理。陈杰：方法学部分。唐轩：数据整理。杨福强：数据整理。彭焕子：数据整理。张天祖：数据整理。李冰清：数据整理。王金全：数据整理。孙光辉：数据整理。赵建中：验证，概念化。

利益冲突声明

作者声明没有已知的财务利益或个人关系可能影响本文的研究工作。

致谢

作者感谢吴洁平医学基金会临床研究专项基金（资助编号：320.6750.2022-23-5）、湖北省综合健康领域关键研究与开发计划支持专项基金（资助编号：2022BCE029）、湖南省科技厅关键领域研发计划（资助编号：2022GK2057）以及襄阳市科技局医疗领域科技计划（资助编号：