无创唾液生物标志物在咽喉反流诊断中的性能研究：迈向精准医疗的新策略

《The Journal of Applied Laboratory Medicine》：Performance Study of Noninvasive Salivary Biomarkers in Laryngopharyngeal Reflux

本研究针对咽喉反流疾病(LPRD)诊断依赖侵入性技术的临床困境，开发了基于Salivette?采集装置的多生物标志物检测方案。研究发现唾液弹性蛋白酶(>49μg/mL)、pH(>7.6)和胆固醇(<2.1 mg/dL)的组合诊断模型可实现阳性预测值93%与阴性预测值100%的精准诊断，为LPRD无创诊断提供了实验室验证依据。

　　

咽喉反流疾病(Laryngopharyngeal Reflux Disease, LPRD)作为一种由胃十二指肠反流引发的上气道炎症性疾病，近年来在耳鼻喉科和消化科门诊中占比高达10%。但诊断金标准——24小时咽喉-食管多通道腔内阻抗-pH监测(24-h Hypopharyngeal-Esophageal Multichannel Intraluminal Impedance pH-monitoring, HEMII-pH)存在明显局限性：不仅成本高昂、操作侵入性强，患者耐受度也较差。这种困境催生了对无创诊断技术的迫切需求。

以往研究多聚焦于胃蛋白酶(pepsin)的检测，但商用试剂Peptest?仅能提供半定量结果，且缺乏完整的分析性能验证数据。更关键的是，LPRD的病理机制与典型胃食管反流病(Gastroesophageal Reflux Disease, GERD)存在差异，其特征表现为直立位、白天发生的碱性气体反流事件。比利时与法国联合研究团队创新性地提出假说：LPRD患者的唾液中可检测到胰腺十二指肠来源的酶类，并通过标准化实验室方法实现定量分析。

为验证这一假说，研究团队前瞻性招募201例经HEMII-pH确诊的LPRD患者和35名健康对照，采用标准化Salivette?装置采集唾液样本。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)、酶学比色法等技术，系统评估了弹性蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、胆固醇、pH值等12项生物标志物的分析性能与临床价值。

研究发现，唾液弹性蛋白酶在LPRD患者中显著升高(中位数49μg/mL vs 36μg/mL, P=0.0005)，而胆固醇水平显著降低(0.7 mg/dL vs 3.4 mg/dL, P<0.0001)，唾液pH值也明显偏碱性(7.4 vs 5.9)。受体操作特征曲线(Receiver Operating Characteristic Curve, ROC)分析确定的最佳诊断界值为：弹性蛋白酶>49μg/mL、pH>7.6、胆固醇<2.1 mg/dL。

最关键的是，双标志物联合诊断模型展现出卓越的诊断效能：弹性蛋白酶与胆固醇组合的灵敏度达100%，特异性91%，阳性预测值93%，阴性预测值100%。相比之下，胃蛋白酶、胰蛋白酶等标志物因多数样本低于检测限而诊断价值有限。

研究方法的核心创新在于建立了符合体外诊断医疗设备法规(In Vitro Diagnostic Medical Devices Regulation, IVDR)要求的分析体系。团队使用Roche Cobas 8000分析模块和多种ELISA试剂盒，通过基质验证、检测限(Limit of Detection, LOD)测定、稳定性测试等标准化流程，确保检测结果的可靠性。特别针对唾液基质优化了检测参数，并采用Ricos生物变异标准进行质量控。

主要研究结果

人群特征：发现队列与验证队列的人口学特征基本匹配，LPRD患者平均反流症状指数(Reflux Symptom Index)达117.7分，咽喉反流事件次数为17.8次/24小时。

分析性能：唾液弹性蛋白酶的检测线性范围为15-500μg/mL，总允许误差(Total Allowable Error, TE)控制在10%-14%之间，符合≤15%的质量目标。胆固醇检测限为0.6 mg/dL，但54%患者样本浓度接近检测下限。

临床效能：单标志物诊断中，胆固醇的曲线下面积(Area Under Curve, AUC)最高(0.976)，但因其浓度接近检测限，不适合单独使用。弹性蛋白酶(AUC=0.707)与pH值(AUC=0.860)中等诊断效能。

讨论与结论

本研究首次建立了符合IVDR标准的LPRD无创诊断体系。唾液弹性蛋白酶作为最可靠的胃肠胰腺十二指肠酶标志物，其检测稳定性显著优于胃蛋白酶等传统标志物。胆固醇虽诊断效能优异，但因检测灵敏度限制，需与弹性蛋白酶联合使用。

较高的唾液pH值可能反映了唾液腺对反流刺激的保护性代偿机制，而弹性蛋白酶在pH 8-8.4环境下仍保持酶活性，提示其在咽喉黏膜炎症中可能持续发挥作用。该研究局限性包括样本量有限、部分样本体积不足等，未来需扩大验证队列。

这项发表于《The Journal of Applied Laboratory Medicine》的研究标志着LPRD诊断从侵入性检查向实验室标准化检测的重要转变。通过单次唾液采集即可实现93%的阳性预测精度，为基层医疗机构的早期筛查提供了可行方案，有望显著提升患者就诊体验与诊疗效率。