在体外筛选过程中，由于靶位点的重新定位，出现了一种意想不到的腺苷烷基化核糖酶

《Journal of the American Chemical Society》：An Unexpected Adenosine-Alkylating Ribozyme Emerged by Target Site Relocation during in Vitro Selection

RNA烷基化核酶研究通过体外筛选与RZ-seq结合获得新型催化RNA RACR，可定向修饰腺苷N1位并靶向NAZN序列，其催化核心结构不同于MTR1并扩展了RNA修饰工具箱。

　　

RNA-烷基化核酶是一类能够催化转录后RNA修饰的RNA分子，它们可以特异性地在RNA上引入甲基基团、生物正交功能基团、荧光团或其他标记物，从而用于RNA结构和动态的生化及生物物理分析。在本研究中，我们通过体外筛选结合高通量测序（RZ-seq）和生化分析方法，获得了一种新型的RNA-烷基化核酶。虽然结构化的RNA文库中提供的目标核苷酸可能是胞苷或鸟苷，但最终确定腺苷是该核酶的修饰位点。在线探测和全面的突变分析有助于揭示核酶变体之间的结构-活性关系，并最终筛选出一种高效活性的RNA-烷基化催化剂RACR。这种核酶利用多种O⁶修饰的鸟嘌呤辅因子，将烷基基团转移到特定内部腺苷的N¹位置。其目标位点位于NAYN（N代表任意核苷酸，Y代表C或U，目标腺苷用下划线标出）保守序列中。RACR能够靶向多种类型的RNA，包括tRNA和snRNA。与先前报道的甲基转移酶核酶MTR1相比，RACR具有独特的催化核心结构，并采用了一种不同的RNA结合机制。因此，RACR丰富了用于RNA后修饰的核酶工具箱。此外，这些研究结果还揭示了体外筛选过程中的关键动态机制，这些机制对于未来开发能够修饰其他核苷（而非腺苷）的核酶具有重要意义。除了对RACR这种新型腺苷修饰核酶进行全面表征外，本研究还应用了RZ-seq方法，这将进一步推动相关研究的发展。