结直肠癌淋巴结分子分析新突破：全淋巴结OSNA检测的预后价值前瞻性多中心研究

《Clinical and Experimental Medicine》：Prognostic value of whole lymph node molecular analysis in colorectal cancer: a prospective multicenter study

本研究针对传统HE染色对结直肠癌淋巴结微转移检测灵敏度不足的临床难题，创新性地采用全淋巴结一步核酸扩增(OSNA)技术进行分子分析。研究发现总肿瘤负荷(TTL)>15,000拷贝/μL是癌症特异性生存(CSS)和无复发生存(RFS)的独立预后因素，为精准分层患者风险、优化术后治疗策略提供了重要依据。

　　

在当今全球癌症负担日益加重的背景下，结直肠癌(CRC)依然稳居癌症相关死亡原因的第二把交椅。尽管治疗手段不断推陈出新，但患者的预后仍然高度依赖于早期诊断和精准分期。值得关注的是，随着筛查项目的广泛开展，早期结直肠癌（I-II期）的检出率已超过70%，显著降低了疾病死亡率。然而，淋巴结转移(LNM)的评估始终是决定患者命运的关键环节，因为它直接关系到术后辅助化疗的决策——这是所有III期和部分高风险II期患者的标配治疗。

目前，淋巴结评估的"金标准"仍是传统的苏木精-伊红(HE)染色。但这种经典方法存在天然短板：它仅能检查不到1%的淋巴结组织，对微转移灶的识别能力有限。研究表明，这些逃过HE法眼的微转移恰恰与患者的不良预后密切相关。为了突破这一技术瓶颈，一步核酸扩增(OSNA)技术应运而生。这项基于逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)原理的检测方法，能够快速、客观、定量地检测淋巴结中细胞角蛋白19(CK19) mRNA的表达量。该技术最初在乳腺癌前哨淋巴结活检中大放异彩，随后在胃癌等其他实体瘤中也展现出检测隐匿转移的卓越能力。

然而，既往结直肠癌领域的OSNA研究都存在一个致命缺陷——组织分配偏倚(TAB)。研究人员不得不将每个淋巴结一分为二，分别进行OSNA和HE检测，这种"分而治之"的策略必然导致假阴性结果，低估淋巴结的真实肿瘤负荷。直到最近，研究人员开创性地采用细胞学涂片(CS)技术，在新鲜离体的淋巴结上实现快速病理分期，才为全淋巴结OSNA分析扫清了障碍。

这项发表在《Clinical and Experimental Medicine》的前瞻性多中心研究，正是基于这一技术突破，旨在探索全淋巴结OSNA分析在结直肠癌中的预后价值，并确立总肿瘤负荷(TTL)这一量化指标的最佳临界值。

研究人员采用了一套严谨的技术路线：首先在手术切除后45分钟内完成淋巴结新鲜取材，通过细胞学涂片进行快速免疫细胞化学(CK19 ICC)染色确定pN分期，随后将淋巴结完整用于OSNA分析，采用pooling方法处理多个淋巴结，最终获得代表整体肿瘤负荷的TTL值。研究纳入158例I-III期结直肠癌患者，平均随访32.4个月，主要终点为癌症特异性生存(CSS)和无复发生存(RFS)。

诊断性能对比：OSNA与细胞学涂片旗鼓相当

研究结果显示，OSNA与CS在淋巴结转移检测上表现出高度一致性（93%）。在158例患者共3751个淋巴结中，OSNA的阳性检出率(24.7%)略高于CS(21.5%)。特别值得注意的是，在CS阴性的患者中，仍有6.5%被OSNA检出阳性，这些患者的TTL值介于320-7,000拷贝/μL之间，恰好印证了HE染色对微转移的检测盲区。

确立预后临界值：15,000拷贝/μL成为风险分水岭

通过X-tile软件分析，研究人员确定15,000拷贝/μL为TTL的最佳预后临界值。当采用这一阈值将患者分为低风险(TTL≤15,000)和高风险(TTL>15,000)两组时，两组患者的RFS出现显著差异。进一步的多组分分析证实，15,000拷贝/μL确实是最能区分预后的阈值。

TTL与病理特征的相关性：揭示生物学行为规律

研究发现TTL值与肿瘤分期、pN分期呈明显正相关，pN0、pN1和pN2患者的平均TTL分别为93.9、29,470.0和38,130.7拷贝/μL。同时，淋巴血管侵犯(LVI)、神经周围侵犯(PNI)和肿瘤沉积(TD)这些侵袭性特征也都与较高TTL值显著相关。多因素分析显示，LVI是TTL>15,000拷贝/μL的独立预测因素。

预后价值验证：高风险患者生存率显著降低

生存分析结果令人信服：5例癌症相关死亡患者中，80%属于TTL>15,000拷贝/μL的高风险组。复发率随着TTL升高而明显增加，三个TTL层级（<250、250-15,000、>15,000拷贝/μL）对应的复发率分别为2.5%、8.7%和40.0%。限制性立方样条回归分析显示，log转换后的TTL与癌症特异性死亡和肿瘤复发之间存在线性剂量反应关系。

多变量Cox回归分析进一步证实，无论是作为连续变量还是分类变量，TTL>15,000拷贝/μL都是CSS和RFS的独立不良预后因素。值得注意的是，CS阳性但TTL≤15,000拷贝/μL的患者，其长期结局与CS阴性患者相当，而只有CS阳性且TTL>15,000拷贝/μL的患者才表现出显著的生存劣势。

讨论与结论：迈向精准淋巴结分期的新纪元

这项研究首次实现了结直肠癌全淋巴结的OSNA分子分析，解决了长期困扰该领域的技术难题。与乳腺癌中建立的25,000拷贝/μL临界值不同，结直肠癌的特异性临界值被确定为15,000拷贝/μL，这一差异可能反映了不同肿瘤类型的生物学特性。

研究的创新性在于将定量化的TTL指标引入结直肠癌预后评估体系，超越了传统仅依赖阳性淋巴结数目的分期方式。尤其重要的是，研究发现仅CS阳性不足以预测不良预后，必须结合TTL量化指标才能准确识别真正的高风险患者。这一发现对临床实践具有重要指导意义：那些仅携带微量肿瘤细胞（可能相当于孤立肿瘤细胞ITCs）的患者，或许可以避免不必要的辅助化疗。

当然，研究也存在一些局限性，如OSNA只能用于新鲜淋巴结、样本量有限、随访时间相对较短等。未来需要开发适用于石蜡包埋组织的分子定量方法，并进行更大规模、更长随访的验证研究。

这项研究标志着结直肠癌淋巴结分期进入了一个新阶段。通过全淋巴结OSNA分析获得的TTL指标，不仅提供了更精准的预后信息，而且为个体化辅助治疗决策提供了可靠依据。随着这一技术的临床推广，结直肠癌患者的治疗将更加精准，避免过度治疗的同时，确保高风险患者获得应有的积极治疗。