一种针对新世界螺旋蝇（Cochliomyia hominivorax）的新型实时PCR方法及其在非破坏性多重检测中的应用，可高效识别螺旋蝇

《Medical and Veterinary Entomology》：A novel real-time PCR for New World screwworm fly (Cochliomyia hominivorax) and its application in a non-destructive multiplex for efficient detection of screwworm flies

针对新世界 screw蠕虫 fly的实时PCR检测方法及非破坏性提取技术的研究，开发了基于cox1基因的多聚检测方法，可同时识别新旧世界 screw蠕虫 fly，灵敏度达每微升少于1个拷贝，并通过诱捕飞虫和幼虫样本验证了其有效性及在未煮沸样本中更高的灵敏度。

　　

摘要

监测和诊断对于早期发现、控制及根除外来害虫至关重要。对于螺旋蝇（screwworm fly）而言，这通常通过针对性监测、对诱捕到的苍蝇进行排除性检测，以及识别与蝇蛆病伤口相关的幼虫来实现。我们提出了一种特异性强且灵敏度高的实时聚合酶链反应（PCR）检测方法，用于检测新世界螺旋蝇（Cochliomyia hominivorax Coquerel，双翅目：家蝇科）。该检测方法针对成年蝇或幼虫中的细胞色素氧化酶亚基1（cox1）基因，当与旧世界螺旋蝇（Chrysomya bezziana Villeneuve，双翅目：家蝇科）的现有检测方法联用时，仍能保持较高的分析灵敏度，检测限可低至每微升反应液中的1个拷贝。为了评估其用于监测和诊断的实用性，我们对野外捕获的苍蝇样本（包括添加了目标DNA的样本）以及煮沸和未煮沸的幼虫样本进行了新型非破坏性DNA提取方法的研究。多重检测方法能够识别出95%的添加了目标DNA的样本中的螺旋蝇，并且所有阳性样本中的螺旋蝇均被成功分离并进行了形态学鉴定。来自不同龄期幼虫的结果证实，该方法同样适用于幼虫检测，其中未煮沸的幼虫样本显示出更高的灵敏度。这种分子检测方法能够同时检测Co. hominivorax和Ch. bezziana，为现有的单一目标检测和破坏性批量检测方法提供了一种可靠的替代方案。此外，该方法在幼虫阶段的鉴定中也具有广泛的应用潜力。

利益冲突声明

作者声明与本手稿的发表不存在任何利益冲突。

数据可用性声明

本手稿中使用的数据可从昆士兰初级产业部电子研究档案馆获取。https://era.dpi.qld.gov.au/id/eprint/15409/（Driver等人，2025）。