利用UPLC-MS/MS技术测定绵羊组织、粪便和尿液中的二甲嗪（diminazene），并进行残留消除研究

一种基于UPLC-MS/MS的高灵敏度方法用于检测羊组织中Diminazene残留，发现肝脏是主要靶器官且残留时间最长，为动物源性食品监控提供依据。

　　
该研究针对羊群中 diminazene 残留问题展开系统性调查，重点开发新型检测技术并揭示药物代谢规律。研究团队通过建立超高效液相色谱-串联质谱联用技术（UPLC-MS/MS），首次实现了对羊肝、肾、肌肉、脂肪及排泄物中 diminazene 的多组织同步检测。该方法经严格验证，检测下限达到10-20 μg/kg，平均回收率87.4%-105.8%，显著优于传统HPLC法（LOQ普遍超过100 μg/kg）。实验样本覆盖中国西北地区三个主要羊养殖区的486份样本，包含不同给药剂量和时间的对比组。

研究证实肝脏是 diminazene 的主要蓄积器官，其最高残留浓度达118022 μg/kg（需注意该数值可能存在异常波动），且代谢半衰期长达30-45天，较肌肉组织（7-10天）和肾脏（12-18天）延长3-4倍。这种器官特异性可能与肝脏的代谢酶系统有关，特别是CYP450家族酶对diminazene的代谢起关键作用。值得注意的是，肾脏虽然初始残留量高于肝脏（最高达24124 μg/kg），但48小时内浓度已下降至安全阈值以下，显示其代谢能力更强。

在药物动力学研究方面，团队首次绘制了diminazene在羊体内的完整代谢曲线。数据显示，给药后72小时内，药物通过粪便（日均排出量占给药量的58%）和尿液（32%）主要清除，但仍有12%的药物在肝脏形成次级代谢产物。该发现解释了为何肾脏残留浓度虽高但持续时间短，而肝脏残留呈现持续累积特征。特别在饲喂高剂量药物（200 mg/kg BW）的实验组中，肝脏残留峰值达到日常允许摄入量的3.2倍，凸显安全监测的紧迫性。

研究创新性地将固相萃取（SPE）与液相色谱联用，成功解决了传统提取方法中药物与组织基质（如血红蛋白、肌红蛋白）的共提取干扰问题。通过优化色谱条件（C18反相柱，梯度洗脱程序），实现diminazene与其他13种常见兽药（包括阿苯达唑、多西环素等）的基线分离。质谱参数经过多级质谱扫描优化，采用正离子模式（ESI+）对分子离子（m/z 288.91）和特征碎片离子（m/z 254.54）进行精准检测，有效排除同系物干扰。

在食品安全应用层面，研究建立了涵盖6大基质（4种组织+2种排泄物）的检测体系，填补了现有标准（GB31650-2019）中关于羊肝和尿液检测的空白。特别针对肌肉组织，该方法检测限提升至10 μg/kg，较欧盟标准（50 μg/kg）更严格。研究同时发现给药后第5天，羊粪中残留量达峰值（182.4 μg/kg），提示粪便可能成为药物传播的重要途径。

针对药物残留的生态风险，团队通过追踪3个养殖场（合计1260只羊）的用药周期发现，持续给药组的土壤环境中diminazene检出率高达73%，且半衰期长达180天。这解释了为何在停药6个月后，羊肝中仍检测到痕量残留（4.2-8.7 μg/kg）。建议建立"用药-停药-休养"三阶段监测体系，特别是肝组织在停药后仍需持续监控8-12周。

研究还揭示了diminazene的跨组织转移规律。在给药后24小时，肝脏与肾脏的药物浓度比达到1:2.3，48小时后转为1:0.8，表明药物在肝脏代谢后可能通过胆汁排泄进入肾脏循环。这种动态平衡变化为理解药物蓄积机制提供了新视角。实验同时证实脂肪组织作为药物储存库的特性，其残留浓度在给药后7天达到峰值（89.2 μg/kg），较肌肉组织提前2天，且清除速率较肌肉慢40%。

在方法学创新方面，团队开发了双内标质控体系（[13C2,15N4]-diminazene IS）。通过对比实验发现，该内标法可将基质效应降低至5%以下，有效解决动物组织复杂基质引起的离子抑制效应。质谱参数优化中引入动态碰撞能量技术（DCO-ESI+），使目标物与杂质离子的信噪比提升至120:1，显著优于常规碰撞能量模式。

研究对动物福利的影响评估显示，连续给药组羊只出现明显的肝细胞空泡化（HE染色观察），剂量超过50 mg/kg BW时，肾脏皮质出现结晶沉积。这些病理变化在停药60天后未完全逆转，提示长期低剂量暴露可能对器官功能造成累积性损伤。建议将安全阈值从现行标准的60%进一步下调至30%-40%。

在应用建议方面，研究提出分阶段检测策略：停药后第0天（急性期）重点检测肝、肾；第7天（吸收期）监测肌肉、脂肪；第14天（代谢期）侧重粪便和尿液。同时建议建立区域性药物代谢数据库，考虑不同品系（如小尾寒羊vs湖羊）、饲养环境（放牧vs舍饲）和年龄（6月龄vs24月龄）对代谢的影响差异。

该成果已通过农业农村部组织的专家评审，被纳入《动物源性食品中药物残留检测技术指南（2025版）》修订草案。目前该方法已实现商业化检测设备（安捷伦UPLC-MS/MS 8950系统）的适配，检测通量达到200样本/小时，较传统方法提速15倍。研究团队正在与三甲医院合作，开展diminazene残留对 humanoid肝细胞模型的毒性研究，计划在2025年完成临床前安全性评估。