一种用于生产重组腺相关病毒（rAAV）载体的分批工艺，该方法采用Sf9-无弹状病毒细胞系

《Current Pharmaceutical Biotechnology》：A Fed-batch Process for the Production of Recombinant Adeno-associated Virus (rAAV) Vectors Using the Sf9-Rhabdovirus-negative Cell Line

基因治疗中重组腺相关病毒（rAAV）载体生产采用Sf9-RVN细胞优化分批培养工艺，通过 fed-batch 工艺使细胞密度达12.9×10^6/mL（批培养的2倍），rAAV产量提升8倍至1.5×10^12 VG/mL，验证了多血清型及目的基因的适用性，并满足监管要求。

　　

摘要

背景：基因疗法已在许多生物学研究以及多种遗传性疾病和癌症的治疗中得到有效应用。目前，重组腺相关病毒（rAAV）是用于基因治疗的主要递送载体之一。通过Sf9细胞生产的rAAV载体具有产量高、易于扩大生产规模和成本低等优点。

方法：本研究使用Sf9-rhabdovirus-negative（Sf9-RVN）细胞来验证和优化rAAV的生产过程，采用 fed-batch 生产工艺显著提高了rAAV的产量。

结果：在 fed-batch 生产过程中，细胞密度达到了12.9×10^6 细胞/mL，约为 batch 文化工艺下的两倍；rAAV 的滴度也提高了约8倍，达到1.5×10^12 VG/mL。通过生产不同血清型和目标基因（GOI）的rAAV，验证了该优化工艺的有效性，所有实验的产量均超过1×10^12 VG/mL。

结论：我们使用Sf9-RVN细胞开发了一种符合监管标准的 fed-batch rAAV 生产工艺。该工艺具有较好的适用性，rAAV 的滴度至少可达到1×10^12 VG/mL，高于文献中报道的10^11 VG/mL的水平。

关键词： rAAV, Sf9-RVN, fed-batch, 工艺开发, 杆状病毒, 昆虫细胞培养