内皮细胞中YAP/TAZ蛋白的缺失可缩小慢性中风病灶的体积，并改变内皮细胞所处的微环境

本研究通过基因敲除小鼠模型，发现内皮特异性YAP/TAZ信号通路在慢性脑缺血损伤中起关键作用。抑制YAP/TAZ可减少28天后的脑梗死体积，机制涉及调控cGAS-STING炎症通路及Wnt-YAP/TAZ信号轴，促进抗炎微环境形成并抑制星形胶质细胞增殖。该研究为脑缺血后神经保护治疗提供了新靶点。

　　
缺血性中风作为全球第二大死亡原因和第三大致残性疾病，其治疗手段仍局限于溶栓和血管再通技术。近年来，脑内皮细胞（bECs）在调节中风病理过程中的作用备受关注，而YAP/TAZ信号通路作为细胞增殖、死亡和血管再生的重要调控者，其功能在脑缺血中的具体机制尚不明确。本研究通过构建内皮细胞特异性敲除YAP/TAZ的小鼠模型，结合多组学分析揭示了YAP/TAZ在脑缺血慢性期神经保护中的双重调控机制。

### 一、研究背景与科学问题
脑内皮细胞作为血脑屏障的核心结构，其功能障碍直接导致脑水肿和神经元丢失。YAP/TAZ信号通路在胚胎期血管发育中起关键作用，但成年后其在脑缺血中的功能尚存争议。现有研究显示，YAP/TAZ敲除可影响血管生成（如视网膜新生血管形成），但其在脑缺血病理进程中的具体作用，尤其是慢性期保护机制尚未阐明。本研究通过时空调控的基因敲除技术，首次揭示了YAP/TAZ在脑缺血慢性期通过调控炎症微环境实现神经保护的新机制。

### 二、创新性研究方法
研究团队采用四组独立实验设计（表1），突破传统单时间点分析的局限：
1. **时空动态追踪**：通过TAZ-GFP荧光报告小鼠，首次可视化到TAZ蛋白在脑缺血后3天达到表达峰值，且定位从内皮细胞核向细胞质扩散
2. **精准细胞操控**：采用Pdgfb-creER系统实现内皮细胞特异性敲除，避免非特异性影响（图S1）
3. **多维度验证体系**：
- 影像组学：7T高场强MRI结合-edm校正技术，实现从急性期（2天）到慢性期（28天）的连续监测
- 单细胞测序：首次在脑内皮细胞层面解析YAP/TAZ敲除后的转录组重塑，发现78个差异表达基因（DEGs）
- 炎症微环境解析：结合流式细胞术（检测12种免疫细胞亚群）和体细胞分离技术（分离bECs与神经细胞群）

### 三、核心发现与机制解析
#### （一）YAP/TAZ的时空表达特征
1. **急性期（0-7天）**：
- TAZ-GFP在缺血侧纹状体3天达峰值表达（较对照组升高2.3倍）
- YAP/TAZ靶基因（Ankrd1、Ccn1等）在6小时后即启动表达，形成时间梯度（6h:24h:72h）
2. **慢性期（14天+）**：
- YAP/TAZ蛋白表达下降50%，但其调控的炎症信号网络仍持续存在
- RNA测序显示，敲除组bECs的炎症相关基因（Cxcl10、Tnfa等）表达水平较对照组升高30%-50%

#### （二）神经保护的双向调控机制
1. **急性期（0-3天）**：
- YAP/TAZ通过激活Wnt-TEAD轴促进内皮增殖（Bmp4、Wnt5b等基因上调）
- 抑制cGAS-STING通路（CXCL10、Sting1等基因下调）
2. **慢性期（7天+）**：
- **核定位调控**：敲除组bECs的TEAD靶基因（Ankrd1、Ccn1）表达显著抑制（下降40-60%）
- **胞质信号抑制**：敲除组bECs的cGAS-STING通路相关蛋白（TBK1、IRF3）表达上调2-3倍
- **免疫微环境重塑**：形成"抗炎-促修复"双信号网络（图3）

#### （三）关键病理机制的突破性发现
1. **cGAS-STING通路的负调控**：
- YAP/TAZ通过直接抑制TBK1激酶活性（机制图1）
- 敲除后CXCL10表达升高3倍，但未观察到迟发性神经炎（与既往研究矛盾）
2. **Wnt-YAP/TAZ轴的时空特异性调控**：
- 核定位的YAP/TAZ通过激活TEAD1/2促进炎症因子（IL-6、Tnfa）表达
- 胞质定位的YAP/TAZ通过抑制STING信号（图4C）

### 四、临床转化价值
1. **治疗窗口期**：发现3天是YAP/TAZ调控机制的关键时间窗，提出"早期抑制-晚期激活"的双阶段治疗策略
2. **新靶点发现**：
- Cxcl10/CXCR3轴：敲除组缺血灶面积减少35%（图3C）
- Mrc1/Arg1比值：敲除组脑水肿体积减少28%（图5B）
3. **联合治疗潜力**：
- YAP/TAZ抑制剂（如 verteporfin衍生物）联合CXCL10拮抗剂可增强疗效
- 敲除组在14天后出现新生血管过度增生（Ang-1表达升高2倍），提示需动态监测治疗效应

### 五、研究局限性及展望
1. **模型局限性**：
- 未能完全排除神经细胞自身YAP/TAZ的调节作用
- 动物模型与临床时间窗存在差异（小鼠3天对应人类72小时）
2. **机制待阐明**：
- YAP/TAZ与TBK1的分子互作网络尚不明确
- CXCL10介导的具体信号通路（如mTOR、HIF-1α）需进一步验证
3. **转化路径**：
- 开发内皮细胞特异性YAP/TAZ抑制剂（如Rapamycin类似物）
- 探索靶向Cxcl10/CXCR3轴的免疫调节剂（如个小分子拮抗剂）

本研究首次揭示YAP/TAZ在脑缺血中存在"双时间窗"调控机制（急性期促血管生成、慢性期抗炎），为开发时空精准治疗策略提供了理论依据。后续研究应重点解析YAP/TAZ在核质穿梭过程中的分子开关机制，以及如何通过调节巨噬细胞极化（M1/M2比值）实现神经修复。