芪归生姜散通过非氧依赖性途径调节缺氧反应，改善糖尿病肾病：耦合网络药理学与实验验证

糖尿病肾病（DKD）的进展与缺氧反应密切相关，QGSJS汤剂通过多靶点调节抑制HIF-1α信号通路，改善肾功能和尿蛋白水平。

　　
糖尿病肾病（DKD）是糖尿病进展至终末期肾脏疾病的常见并发症，其病理机制涉及慢性缺氧反应、炎症和纤维化。近年来，传统中医药在DKD治疗中的应用备受关注，其中 Qi-Gui-Sheng-Jiang-San（QGSJS）汤剂因结合了补气养血与祛风解毒的中医理论，在临床中表现出显著的肾脏保护作用。本研究通过整合网络药理学和体内实验，系统揭示了QGSJS抑制DKD的核心机制。

### 一、研究背景与意义
DKD的病理核心是长期缺氧导致的肾组织结构损伤。传统中医认为，DKD属“气虚血瘀”范畴，需通过调和气血、改善微循环实现治疗。QGSJS由当归补血汤（DGBXT）和升陷散（SJS）改良而成，包含黄芪、当归、僵蚕、大黄等药材，在临床应用中已验证其改善尿蛋白和肾功能的效果。然而，其作用机制尚未明确，本研究通过多维度分析，首次系统阐明QGSJS通过调控缺氧响应通路抑制DKD的分子机制。

### 二、网络药理学方法解析活性成分与靶点
研究采用网络药理学结合实验验证的方法，分三阶段展开分析：
1. **活性成分筛选**：通过TCMSP数据库和化学数据库筛选出57个候选成分，其中槲皮素、山柰酚和异鼠李素等黄酮类化合物占比较高。这些成分具有高口服生物利用度（OB≥30%）和药物-like性质（DL≥0.18），符合临床用药安全性要求。
2. **靶点预测**：整合GeneCards、OMIM和DrugBank数据库，发现QGSJS可作用于72个DKD相关靶点。核心靶点包括HIF-1α（缺氧诱导因子1α）、IL-6、VEGFA等，这些靶点在炎症、纤维化和血管生成中起关键作用。
3. **PPI网络构建**：利用STRING数据库构建蛋白互作网络，筛选出HIF-1α、NFKBIA、IL-6和VEGFA为关键枢纽基因。HIF-1α作为核心调控因子，与VEGFA形成正反馈环路，同时与NF-κB、STAT3等炎症信号通路紧密关联。

### 三、关键实验结果
1. **成分验证**：HPLC-MS证实QGSJS含有11种主要成分，包括黄芪甲苷、当归皂苷、大黄酸等，与网络药理学预测高度一致。
2. **动物模型改善**：db/db糖尿病小鼠实验显示，QGSJS组较模型组体重增长减缓（p<0.05），空腹血糖（FBG）和糖化血清白蛋白（GSP）显著降低（p<0.01），同时血肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）水平改善，证实其肾脏保护作用。
3. **分子机制验证**：
- **HIF-1α通路抑制**：QGSJS显著降低肾组织HIF-1α蛋白表达（p<0.001），但PHD2（HIF-1α降解酶）水平未受影响，提示其作用可能通过非氧依赖途径实现。
- **炎症因子调控**：血清IL-6、TNF-α和IL-1β水平较模型组下降30%-50%（p<0.01），病理切片显示肾间质炎症细胞浸润减少。
- **纤维化指标改善**：Masson染色显示肾小管间质纤维化面积减少42%，TGF-β1表达下降（p<0.05），证实抗纤维化作用。

### 四、作用机制解析
1. **多靶点协同调控**：
- **HIF-1α负调控**：通过抑制PI3K/Akt、NF-κB和STAT3三条信号通路，阻断HIF-1α的稳定性和转录活性。其中，槲皮素抑制HIF-1α核转位，山柰酚下调STAT3磷酸化，异鼠李素抑制NF-κB活化。
- **血管稳态调节**：降低VEGFA和VEGFR表达（p<0.001），抑制异常血管生成，同时上调一氧化氮合成酶（iNOS）活性，改善微循环。
2. **非氧依赖途径创新性发现**：
- 实验首次证实QGSJS通过抑制Akt磷酸化（p-Akt下降40%）和NF-κB核转位，间接调控HIF-1α表达，这与传统认为的氧依赖降解机制形成互补。
- NOTCH1信号通路被抑制，提示可能通过调节细胞增殖相关通路发挥抗纤维化作用。

### 五、临床转化价值
1. **复方优势**：QGSJS结合了DGBXT的补气养血作用（黄芪、当归）和SJS的解毒通络效果（僵蚕、大黄），形成"扶正祛邪"的协同效应。
2. **多维度疗效**：除肾脏保护外，还能改善胰岛素抵抗（HOMA-IR降低31.5%），调节脂代谢（TC下降28%，TG降低25%），体现中医"整体观"的治疗特点。
3. **安全性验证**：实验未发现对PHD2的显著抑制，提示未干扰正常HIF-1α降解机制，安全性较高。

### 六、研究局限与展望
1. **机制深度**：HIF-1α非氧依赖调控的具体分子开关尚未明确，需进一步研究mTORC1和AMER1等潜在调控蛋白。
2. **复方复杂性**：57个活性成分可能通过超过200条信号通路发挥作用，建议采用单成分-多靶点网络分析揭示协同机制。
3. **临床转化**：需开展多中心临床试验验证疗效稳定性，并建立基于代谢组学的精准用药模型。

### 七、对中医理论的现代诠释
本研究从分子层面印证了中医"复方配伍"理论：DGBXT（黄芪、当归）通过激活PI3K/Akt通路增强细胞适应性，而SJS（僵蚕、大黄）通过抑制NF-κB和STAT3通路减轻炎症反应。两者协同作用形成"激活保护"的双向调节，符合中医"虚实夹杂"的病机认知。

### 八、总结
QGSJS通过多靶点、多途径协同作用实现DKD治疗：①抑制HIF-1α的非氧依赖性激活；②阻断IL-6/STAT3和TNF-α/NF-κB炎症信号；③调节VEGF介导的异常血管生成。其作用机制突破传统"缺氧适应"理论框架，为中药复方现代化研究提供了新范式，提示未来可开发基于HIF-1α/VEGF双靶点的中药新药。