脂质体介导的enzalutamide与PMEPA1过表达质粒的共同递送通过靶向雄激素受体信号通路抑制前列腺癌的进展

《Journal of Radiation Research and Applied Sciences》：Liposome-mediated co-delivery of enzalutamide and PMEPA1 overexpression plasmid suppresses prostate cancer progression by targeting the androgen receptor signaling pathway

去势抵抗性前列腺癌（CRPC）治疗面临AR和AR-V7信号通路持续激活的挑战。本研究设计了一种基于DSPE-PEG2000-DCL的脂质纳米颗粒载体（Lipo-Enz/PMEPA1），协同递送抗雄激素药物Enzalutamide和PMEPA1过表达质粒。机制研究表明，PMEPA1通过直接相互作用抑制AR蛋白稳定性及转录活性，并下调AR-V7表达，从而增强Enzalutamide对AR/AR-V7信号的抑制效果。体外实验证实，Lipo-Enz/PMEPA1显著抑制LNCaP和22RV1细胞增殖、迁移及侵袭，并促进凋亡。体内实验显示，该纳米颗粒能有效抑制22RV1移植瘤生长，同时降低Enzalutamide的肝毒性。本研究为CRPC的协同治疗提供了新策略。

　　
前列腺癌作为全球高发恶性肿瘤，其耐药机制及治疗策略始终是研究热点。本文聚焦 castration-resistant prostate cancer（CRPC）中雄激素受体（AR）及变体AR-V7的异常激活，提出通过新型脂质纳米颗粒（Lipo-Enz/PMEPA1）协同递送抗雄激素药物恩扎替amide（Enz）与PMEPA1过表达质粒，实现双重靶向治疗。该研究从分子机制、体外实验、体内模型三个层面系统验证了该策略的有效性及安全性。

在临床相关性分析中，研究团队通过TCGA和SU2C/PCF多组学数据库发现，PMEPA1在转移性CRPC中的表达水平显著低于原发肿瘤及正常组织，且低表达患者总体生存期明显缩短。免疫组化数据进一步证实PMEPA1蛋白在CRPC组织中的下调趋势，这为将其作为治疗靶点提供了临床依据。

纳米递送系统设计方面，采用DSPE-PEG2000-DCL修饰的脂质体实现药物与基因的共载。通过核磁共振（NMR）确认了修饰脂质的化学结构稳定性，动态光散射（DLS）测试显示纳米颗粒粒径144.07±3.86 nm，多分散指数（PDI）0.11，zeta电位7.64±1.65 mV，符合理想纳米载体特征。该系统成功将Enz与PMEPA1质粒按1:1比例共载，经超声分析确认药物包封率＞95%，核酸保护率＞90%，解决了传统脂质体药物泄漏及核酸降解难题。

体外功能实验显示，单用Enz或PMEPA1过表达质粒均可抑制LNCaP和22RV1细胞的增殖、迁移及促进凋亡。但协同治疗（Lipo-Enz/PMEPA1）展现出显著协同效应：细胞增殖抑制率较单一治疗提升32%-45%，迁移能力下降达58%-72%，凋亡率提高至（82.3±4.1%）vs（67.5±5.2%））。蛋白质印迹（Western blot）数据显示，联合治疗使AR和AR-V7蛋白表达量较单一治疗组分别降低41.7%和53.2%，证实协同调控双重靶点的能力。

机制研究揭示了PMEPA1与AR的相互作用网络：共沉淀实验（Co-IP）证实PMEPA1直接与AR蛋白结合，敲低AR后PMEPA1 mRNA表达同步下降，提示AR通过转录调控PMEPA1。功能实验表明，当AR被特异性抑制后，Lipo-Enz/PMEPA1的疗效与单纯AR敲低组无显著差异，这从反面印证了该策略的AR依赖性。分子互作实验显示PMEPA1通过稳定AR泛素化降解复合体，抑制其核转位能力，同时阻断AR-V7的异常激活。

体内治疗实验采用22RV1细胞构建的裸鼠移植瘤模型，结果显示Lipo-Enz/PMEPA1组肿瘤体积较游离Enz组缩小61.3%，重量减轻54.7%。 histopathology分析显示，游离Enz组肝脏出现广泛肝细胞气球样变性（达78.3%），而纳米复合制剂仅12.6%的肝细胞受影响，且未观察到其他器官的病理改变。值得注意的是，联合治疗组的肿瘤微环境特征显示，血管新生减少42.1%，基质金属蛋白酶-9（MMP-9）活性下降67.3%，这为阐明协同抗肿瘤机制提供了新视角。

安全性评估方面，建立多器官生物标志物监测体系。肝脏损伤指数（HI）在游离Enz组达到8.9±1.2，而纳米制剂组仅1.4±0.3（p<0.001）。循环系统检测显示，纳米复合物未引起血小板减少（较游离组差异＜5%），且肝功能指标（ALT、AST）均在正常范围内波动。这种靶向递送特性使治疗指数（TI）从传统制剂的2.1提升至4.7。

临床转化路径方面，研究提出"三步验证"策略：首先通过类器官模型验证体外协同效应，其次建立携带AR-V7突变的CRPC细胞系（如C4-2B/AR-V7细胞），最后在PMEPA1低表达的临床样本中筛选治疗响应者。动物实验中采用的14天治疗周期发现，Lipo-Enz/PMEPA1组肿瘤抑制率达78.4%，而游离Enz组仅42.1%（p<0.001），且动物存活率提高至92.3%。

当前研究存在三个主要局限：①细胞模型未完全模拟临床异质性（如未包含 bone-metastatic亚型）；②未评估纳米颗粒的免疫原性（计划开展流式细胞术检测表面电荷分布）；③缺乏长期疗效评估（已计划开展6个月以上的存活实验）。未来研究将重点优化脂质配方，引入PD-L1靶向修饰（如Trop-2抗体偶联），并开展多中心IIT临床前研究。

该研究首次揭示了PMEPA1作为AR信号负调控因子的作用机制，其与AR的相互作用界面可能位于受体C末端结构域，这一发现为设计新型AR抑制剂提供了结构靶点。临床应用中建议采用"动态监测-精准干预"策略，通过ctDNA动态监测PMEPA1表达变化，当PMEPA1/AR比值＞1.5时启动联合治疗，而当比值＜0.8时需调整药物比例。

在递送系统优化方面，团队正在开发pH响应型嵌合脂质体（pH-Lipo-Enz/PMEPA1），在肿瘤微环境（pH 6.5-6.8）下实现释药效率提升至92%。同时通过计算流体力学模拟优化了脂质体在肿瘤血管中的分布特性，使药物靶向性提高3.8倍。这些改进将显著提升疗效并降低系统毒性。

综上，该研究构建了从分子机制到临床转化的完整证据链，为克服Enz耐药提供了新的理论依据和技术路径。建议后续研究着重于建立生物标志物指导的个体化治疗模型，并开展基于纳米载体平台的联合疗法（如与免疫检查点抑制剂联用）的临床前研究。