《Phytomedicine》：Yangxue Qingnao Wan Ameliorates Cognitive Impairment in Scopolamine-induced AD mice via Modulating Neuropeptide Signaling Pathways and Suppressing Neuroinflammation
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线粒体自噬调控剂银杏内酯BII通过激活Parkin依赖通路改善缺血性脑损伤，减轻脑 infarction体积、氧化应激和线粒体功能障碍，机制涉及Parkin及p-Parkin Ser65磷酸化增强。
刘月阳|尚汉晓|张璐|傅蓉|李亚怡|王卓|甄艳茹|张琪|赵阳|王观南|周明生
沈阳医学院血管生物学重点实验室，沈阳医学院科学与实验研究中心，中国辽宁省沈阳市玉虹区黄河北路146号，110034
摘要
背景
缺血性中风（IS）与线粒体自噬的失调有关。从Anemarrhena asphodeloides Bunge中提取的复杂呋喃甾体皂苷——Timosaponin B-II（TBII）已被证明在调节自噬过程中起着关键作用。然而，TBII是否通过调节自噬（特别是Parkin依赖性途径）来发挥治疗作用，目前尚未得到研究。
目的
本研究探讨TBII是否可以通过增强Parkin依赖性的线粒体自噬来减轻脑缺血损伤。
方法
我们使用永久性大脑中动脉闭塞（pMCAO）模型和小鼠以及氧糖剥夺（OGD）处理的神经元来评估TBII对脑缺血损伤的影响。通过Western blot、透射电子显微镜（TEM）和免疫荧光技术检测线粒体自噬和线粒体功能。同时使用Parkin敲低（shPrkn慢病毒）和线粒体自噬抑制剂Mdivi-1来验证TBII的作用机制。
结果
连续7天腹腔注射TBII（10、20、40 mg/kg）显著减少了pMCAO小鼠的脑梗体积、脑水分含量和神经功能缺损，并减轻了体内和体外的神经元死亡。分子对接、细胞热位移分析（CETSA）、药物亲和力响应目标稳定性（DARTS）和分子动力学模拟证实TBII能够特异性结合并稳定Parkin，表明其具有增强线粒体自噬的潜力。TBII通过上调Parkin和p-Parkin（Ser65）来改善线粒体自噬功能，促进线粒体的泛素化、自噬底物SQSTM1的降解以及缺血后的受损线粒体清除。此外，TBII还能维持线粒体膜电位（MMP），抑制氧化应激，并恢复线粒体功能和超微结构。这些效应可被线粒体自噬抑制剂Mdivi-1和Parkin敲低所逆转。
结论
本研究表明，TBII通过增强Parkin依赖性的线粒体自噬来减少氧化应激、保护线粒体功能，并最终减轻缺血性脑损伤。我们的研究首次提供了支持TBII作为缺血性中风治疗药物的有力证据。
部分内容摘要
背景
缺血性中风（IS）是全球死亡和永久性残疾的主要原因之一。其病理生理机制始于脑血流急剧减少，随后导致动脉闭塞，从而使神经元生存所需的氧气和葡萄糖供应迅速耗尽。这种能量供应不足会引发一系列有害的连锁反应，最初表现为兴奋性毒性谷氨酸的释放、离子失衡和线粒体功能障碍，进而导致更严重的后果。
动物与伦理声明
实验所用C57BL/6雄性小鼠来自辽宁长盛生物技术有限公司。小鼠在标准条件下饲养（12小时光照-12小时黑暗周期，25°C），可自由摄取食物和自来水。所有实验程序和处理均符合美国国立卫生研究院关于实验室动物护理和使用的指南（NIH出版物编号8023，1978年修订版），并获得了沈阳医学院实验动物伦理委员会的批准。
TBII治疗可减轻缺血性损伤并改善缺血后的神经元损伤
TBII的化学结构见图S1。通过激光散斑技术测量了pMCAO模型建立后0.5小时、3小时和24小时的脑血流情况，结果显示脑血流逐渐下降，证实了模型的成功建立。然而，TBII处理并未显著影响脑血流（图1A和B）。
讨论
本研究首次证明TBII具有显著的抗缺血性中风作用，可能是通过激活Parkin依赖性的线粒体自噬途径实现的，该途径有助于清除受损线粒体、改善线粒体功能并抑制氧化应激（图9）。
据报道，TBII具有良好的水溶性和稳定性。其药代动力学参数包括吸收、分布、代谢等。
作者贡献声明
刘月阳：撰写初稿，负责监督。尚汉晓：进行正式数据分析与数据管理。张璐：制定实验方法并参与实验研究。傅蓉：制定实验方法并参与实验研究。李亚怡：制定实验方法并参与实验研究。王卓：制定实验方法并参与实验研究。甄艳茹：制定实验方法并参与实验研究。张琪：制定实验方法并参与实验研究。赵阳：进行正式数据分析与数据管理，提出研究概念。王观南：撰写论文并负责审稿与编辑。周明生：撰写论文并负责审稿与监督。
致谢
本项目得到了中国国家自然科学基金（资助编号：82270434、81970357）对周明生的支持，中国国家自然科学基金（资助编号：82100316）对张璐的支持，以及中国国家自然科学基金（资助编号：82574406）、辽宁省科技厅重点研发项目（项目编号：2025JH2/101300019）、沈阳U35杰出青年人才计划（项目编号：RC240612）和辽宁省教育厅研究项目的支持。
