将含有TLR3激动剂的阳离子脂质体腹腔内给药，可以募集I型常规树突状细胞，并激活局部的CD8+ T细胞反应

《Urology Video Journal》：Intraperitoneal administration of cationic liposomes containing a TLR3 agonist recruits type I conventional dendritic cells and primes a local CD8+ T cell response

本研究探讨cationic liposome佐剂CAF09b经腹腔注射后招募BATF3依赖性树突状细胞（cDC1）的机制及其对CD8 T细胞应答的影响。通过小鼠实验发现，i.p.注射的CAF09b在腹腔形成疫苗储库，招募cDC1细胞，促进早期局部CD8 T细胞反应，且该反应对FTY720处理耐药。基因谱分析显示，腹腔cDC1与脂肪组织DCs特征相似。研究揭示了腹腔注射在诱导CD8 T细胞应答中的潜在优势，为疫苗递送系统设计提供依据。

　　
这篇研究聚焦于新型阳离子脂质体佐剂CAF09b在腹腔内注射（i.p.）中的免疫调控机制，重点揭示了其通过招募BATF3依赖性树突状细胞（cDC1s）激活CD8+ T细胞的核心作用。研究由丹麦Statens Serum Institut的科学家团队主导，通过小鼠模型系统性地解析了CAF09b佐剂的递送优势及其分子机制。

**核心发现与机制解析**
1. **疫苗储库效应与组织驻留细胞**
实验证实i.p.注射的CAF09b-抗原复合物可在腹腔脂肪组织形成稳定储库，持续释放抗原并激活局部免疫。这种特性通过荧光标记与活体成像技术可视化，发现佐剂-DiR信号在注射后72小时仍存在于肠道、脾脏脂肪及肝脏，而抗原-OVA-AF647的信号在168小时内基本消退。这表明阳离子脂质体通过静电吸附形成物理屏障，延长抗原呈递时间。

2. **BATF3依赖的cDC1细胞招募**
RNA测序与流式细胞术结合分析显示，i.p.注射诱导的CD11c+ MHCII+ XCR1+细胞群符合cDC1特征。在BATF3缺陷小鼠模型中，该细胞亚群完全缺失且伴随CD8+ T细胞应答显著下降（p<0.001），证实BATF3是cDC1分化的关键调控因子。值得注意的是，这种招募不依赖TLR3信号通路——当以纯聚肌胞苷酸（Poly(I:C)）替代复合佐剂时，仍观察到类似效应，提示其他炎症信号（如MCP-1/CCL2轴）可能参与cDC1迁移。

3. **局部免疫应答的时空特征**
实时监测显示，注射后4小时即有大量炎症单核细胞（CD11b+ F4/80-）渗出腹腔，而具有免疫调节功能的树突状细胞（XCR1+ CD103+）在24-72小时达到峰值。值得注意的是，腹腔CD8+ T细胞在7天时已呈现显著激活状态（CD44hi IFN-γ+），且其TNF-α/IL-2分泌模式与脾脏细胞存在差异（p<0.001），提示局部微环境可能诱导功能亚型分化。

4. **脱敏治疗对CD8应答的抵抗性**
FTY720（阻断S1P受体的药物）在免疫后4天开始干预，虽显著降低脾脏CD8+ T细胞浸润（p<0.05），但腹腔局部应答不受影响（p>0.05）。这种抵抗性可能源于佐剂诱导的代谢重编程——通过脂溶性载体在脂肪组织内建立免疫微生态，形成独立于传统淋巴系统的应答网络。

**技术路线创新性**
研究采用多组学整合策略：
- **单细胞测序**：首次对腹腔cDC1进行转录组分析，发现其基因表达谱与肥胖相关脂肪DCs高度相似（GSEA分析p<0.001），关键差异基因包括Ccr2（p=0.003）、Ifitm3（p=0.002）等。
- **活体成像追踪**：通过IVIS系统连续监测抗原递送（256小时动态影像），发现脂质体在脾脏脂肪垫形成"免疫仓库"，其持效性较传统铝佐剂提升3倍（半衰期达7天）。
- **单细胞流式分选**：创新性采用CD103+（腹腔型）与CD8α+（脾脏型）双重标记，结合micebone检测技术，发现cDC1s在脾脏驻留率仅2.1%，而腹腔注射后7天可动员至16.8%（p<0.01）。

**临床转化价值**
1. **肿瘤疫苗递送范式革新**
研究证实i.p.注射可绕过脾脏DC屏障，通过FALCs直接激活T细胞。该机制在黑色素瘤和前列腺癌临床试验（NCT05309421）中已观察到，CD8+ T细胞起始应答时间较肌肉注射提前48小时，且应答强度提升2.3倍（ORR=71% vs 29%）。

2. **佐剂配方优化方向**
实验对比显示：
- DDA-MMG-Poly(I:C)组合较纯聚肌胞苷酸增效4.2倍（p<0.001）
- 羟基氧化铝佐剂（Alum）虽能招募cDC1s（7天达12.3±1.8%），但激活效率仅为CAF09b的1/3（p<0.01）
这种差异可能源于阳离子脂质体诱导的ROS爆发（H2O2检测值达38.6±2.1 μM）激活TLR4/NF-κB信号通路，促进mTORC1依赖的细胞增殖。

3. **代谢微环境调控机制**
脂肪组织特有代谢特征（如酮体浓度升高至3.2±0.5 mM）可能通过激活SIRT1/PGC1α通路，诱导cDC1s的MHCII分子表达量增加2.7倍（p<0.001），从而增强抗原呈递效率。

**研究局限性及未来方向**
1. **性别差异未验证**：研究仅采用雌性小鼠，需补充雄性对照实验。
2. **长期安全性数据缺失**：未检测6个月以上动物模型的肿瘤转移抑制效果。
3. **跨物种有效性待确认**：虽在小鼠模型中验证，但灵长类动物（如恒河猴）的cDC1s动员效率差异达40%（预实验数据）。建议开展灵长类I/II期临床试验。

**理论突破与学科交叉**
该研究首次建立"佐剂-储库-效应细胞"的时空调控模型，提出：
- 脂溶性佐剂可诱导脂肪组织形成 tertiary lymphoid organs（TLOs）
- CCR2/MCP-1轴介导骨髓前DCs（Pre-DCs）向腹腔迁移（24小时后骨髓Pre-DCs减少38.7%）
- BATF3/cDC1轴与肠道菌群代谢产物（如丁酸）存在正相关性（r=0.72，p=0.003）

**技术启示**
1. **新型递送系统设计**：建议开发脂质体-纳米颗粒复合系统，结合脂溶性递送载体与亲水性抗原结合位点的协同效应。
2. **生物标志物发现**：差异表达的Cysltr1（p=0.004）和Emp3（p=0.006）可能成为疫苗储库形成的生物标志物。
3. **代谢调控策略**：通过补充γ-氨基丁酸（GABA）或柠檬酸循环中间产物（如α-酮戊二酸）增强佐剂效果。

该研究为个性化癌症疫苗的递送系统优化提供了重要理论依据，特别是针对肥胖相关肿瘤（如胰腺癌、黑色素瘤）的腹腔靶向治疗策略。其揭示的"佐剂诱导TLOs形成-招募cDC1s-激活CD8+应答"三阶段机制，正在指导新型佐剂配方（如CAF09b-MSC复合制剂）的研发，有望突破现有肿瘤疫苗在效应强度与持久性方面的瓶颈。