《Cellular Signalling》：Cannabidiol alleviates methamphetamine-induced autophagy and oxidative stress by suppressing sigma 1 receptor expression
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肝星状细胞（HSC）活化通过CCL11/CCR3轴介导的ECM紊乱和免疫抑制微环境形成，削弱lenvatinib（LEN）对肝癌的疗效，联合CCR3抑制剂可逆转此效应。
Na Qiang|Cheng Lan|An Lin|Hiroaki Kanzaki|Masanori Inoue|Naoya Kanogawa|Takayuki Kondo|Sadahisa Ogasawara|Masato Nakamura|Shingo Nakamoto|Dawei Cui|Hang Lv|Qiuran Xu|Guiping Chen|Junjie Ao
中国浙江省杭州市浙江中医药大学第一附属医院（浙江省中医院）胃肠外科
摘要
肝星形细胞（HSC）的活化在慢性肝病向肝细胞癌（HCC）的进展中起着关键作用，它们通过破坏细胞外基质（ECM）并促进免疫逃逸来发挥作用。然而，LEN（乐伐替尼）治疗后的HSC对肿瘤微环境（TME）的影响尚未得到充分研究。在本研究中，LEN治疗后HCC患者的血清和HSC上清液中的CCL11分泌水平均升高。在HSC中，CCL11蛋白表达增加，而CCR3抑制剂则降低了CCL11及相关基因Col3a1和Col16a1的表达。基于Ccl11及其前10个相关基因的表达，371个TCGA HCC样本被分为高表达组（175个）和低表达组（196个）。通过GO和KEGG分析，高表达组中与ECM和细胞趋化性相关的通路上调。肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）和中性粒细胞（TANs）及其标记基因（Cd206和S100a9）在该组中也富集。从机制上讲，CCL11的过度产生通过CCL11/CCR3信号通路激活HSC，从而增加CCL26的分泌，促进TAMs和TANs的浸润。在小鼠实验中，与仅移植肿瘤细胞相比，LEN对含HSC的肿瘤控制效果较差，并且肿瘤中的COL3A1、CD206和S100A9表达增加。将CCR3抑制剂与LEN联合使用可以逆转这些效应。总之，CCL11的过度产生通过CCL11/CCR3轴驱动HSC活化，形成ECM紊乱和免疫抑制的TME，从而影响LEN治疗的效果。CCR3抑制剂与LEN的联合治疗可能代表一种新的治疗策略。
引言
肝细胞癌（HCC）是一个全球性的健康挑战，是癌症相关死亡的主要原因[1]。它主要发生在慢性肝损伤的背景下，经过肝纤维化和肝硬化的明确阶段逐渐发展[2]。肝星形细胞（HSC）在这一病理过程中起核心作用，受到肝损伤激活后，它们会表型转变为类似肌成纤维细胞的细胞，成为过量细胞外基质（ECM）沉积的主要驱动因素，从而促进纤维化和肝硬化的进展[[3], [4], [5]]。此外，积累的ECM还可能进一步促进肝脏恶性肿瘤的发展[6]。除了其纤维生成作用外，激活的HSC现在被认为是已建立HCC中肿瘤微环境（TME）的关键构建者：它们显著促进肿瘤进展、血管生成和转移[[7], [8], [9], [10]]，并且重要的是，它们创建了一个免疫抑制的环境，有利于免疫逃逸并限制治疗效果[11,12]。
虽然手术切除可以为早期疾病提供潜在的治愈方法，但相当一部分患者随后会出现肿瘤复发[13,14]。此外，大多数患者在晚期被诊断出来，且肿瘤无法切除[15]。对于这些患者，包括乐伐替尼（LEN）在内的多激酶抑制剂构成了一线标准治疗[16,17]。此外，将局部治疗（如经动脉化疗栓塞）与包括LEN和免疫检查点抑制剂（ICIs）在内的全身治疗相结合，成为一种非常有前景的一线联合策略[[18], [19], [20]]。尽管取得了这些进展，但对LEN的原始和获得性耐药性的发展仍然是一个主要的临床障碍，严重限制了患者的长期获益[21,22]。耐药性的机制非常复杂，涉及TME内的动态适应[23]。
许多研究已经探讨了HCC的预后指标，如特异性表达的基因和分泌因子[24,25]。其中，趋化因子信号通路是TME内细胞通讯的关键介质，影响炎症、纤维化和免疫细胞招募[26,27]。其中，C
C motif趋化因子配体11（CCL11）/C-C motif趋化因子受体3（CCR3）轴已被确定为肝纤维化的强效激活因子[28,29]。特别是，CCL11主要通过HSC上表达的CCR3信号传导，可以建立自分泌循环，持续激活HSC并促进纤维生成表型和ECM的产生[28]。有趣的是，LEN治疗后的HSC在TME中的具体作用和行为仍大部分未得到探索。
因此，我们旨在阐明通过CCL11/CCR3轴激活的HSC对TME的调节作用，并使用体外培养和体内异种移植模型评估CCR3抑制剂作为联合治疗药物的潜力。
细胞培养和试剂
五种HCC细胞系——Huh7、JHH7、Hep3B、HepG2和PLC/PRF/5（日本大阪研究生物资源库）以及小鼠HCC细胞系Hepa1–6（日本大阪研究生物资源库）在Dulbecco改良Eagle培养基（DMEM；Nacalai Tesque公司，京都，日本）中培养。该培养基添加了10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素-链霉素。人类HSC细胞系LX-2（#SCC064，EMD Millipore公司，美国加州）也在此培养基中培养。
LEN治疗后CCL11的过度合成促进了HSC的ECM相关基因表达
比较了人类HCC细胞系Huh7、JHH7、Hep3B、HepaG2和PLC/PRF/5（PLC）与HSC细胞系LX-2中的Ccl11表达。结果显示LX-2细胞中的Ccl11表达明显高于HCC细胞系（补充图1）。LEN治疗不仅显著增加了LX-2细胞中的CCL11 mRNA和分泌水平（图1A和B），还增加了HCC患者血清中的CCL11水平（图1C）。相关性分析表明，在HCC组织中（来自
讨论
本研究揭示了一种新的机制，即LEN治疗通过CCL11/CCR3轴悖论性地激活了HSC，导致ECM紊乱和免疫抑制，最终削弱了其抗肿瘤效果。
晚期HCC的系统治疗已经进入了序贯和联合治疗的时代。经典的一线药物索拉非尼（sorafenib）和LEN的基础地位已被基于ICIs的组合疗法所取代，特别是阿特珠单抗（atezolizumab）加贝伐单抗（bevacizumab）和度伐卢单抗（durvalumab）加...
CRediT作者贡献声明
Na Qiang：撰写——原始草案、可视化、方法学、研究、正式分析、数据管理。Cheng Lan：验证、研究、正式分析、数据管理。An Lin：研究、数据管理。Hiroaki Kanzaki：资源提供。Masanori Inoue：资源提供。Naoya Kanogawa：资源提供。Takayuki Kondo：资源提供。Sadahisa Ogasawara：资源提供。Masato Nakamura：资源提供。Shingo Nakamoto：资源提供。Dawei Cui：资源提供。Hang Lv：资源提供。Qiuran Xu：监督、资源提供。Guiping
伦理批准
所有动物实验程序均获得了浙江大学医学院动物护理和使用委员会的批准。
资助
本研究部分由杭州医学院的青年研究基金基础科学研究业务费用 - 基础科学研究项目资助（KYQN2024007）。
利益冲突声明
Hiroaki Kanzaki从日本东京的Takeda公司和德国勒沃库森的Bayer公司获得了酬金。Sadahisa Ogasawara从Bayer公司、日本东京的Eisai公司、美国印第安纳波利斯的Eli Lilly公司、日本东京的Chugai Pharma公司、英国剑桥的AstraZeneca公司、美国新泽西州Kenilworth的Merck & Co., Inc.公司获得了酬金；同时从Bayer公司、Eisai公司、Merck & Co., Inc.公司、Chugai Pharma公司、Eli Lilly公司和AstraZeneca公司获得了咨询或顾问费用；此外还获得了Bayer公司、AstraZeneca公司和Eisai公司的研究资助。其他作者声明没有利益冲突。
