关键酸橙（Citrus aurantiifolia）果皮乙醇提取物的安全性评估：急性毒性研究、90天重复剂量研究及遗传毒性研究

《Regulatory Toxicology and Pharmacology》：Regulatory safety evaluation of key lime ( Citrus aurantiifolia) peel ethanol extract: Acute, 90-day repeated-dose, and genotoxicity studies

本研究对Key lime peel ethanol extract（KLPE）进行毒理学评估，包括急性口服毒性、90天重复剂量及遗传毒性测试，结果显示无毒性反应，LD50和NOAEL均超过2000 mg/kg BW/day，证实KLPE作为功能性食品的安全性。

　　

崔允珍|金成辉|金杜贤|朴庆植|李美英|赵成默

韩国釜山浦项国立大学食品科学研究所食品科学技术系，邮编48513

摘要

青柠（Citrus aurantiifolia）的果皮是果汁加工的主要副产品，富含黄酮类化合物和其他生物活性物质。为了支持其作为食品成分的安全使用，我们对青柠果皮乙醇提取物（KLPE）进行了化学表征，并根据OECD指南（TG 420、408、471、473、474）和GLP要求进行了全面的毒理学评估。评估内容包括急性口服毒性试验、为期90天的重复剂量研究（随后为28天的恢复期），以及体外和体内的遗传毒性试验。KLPE未引起任何死亡或临床症状，体重、食物摄入量、血液学指标和器官重量与对照组相当。未观察到组织病理学损伤或遗传毒性效应。LD₅₀和未观察到不良效应水平（NOAEL）均超过2,000 mg/kg BW/天（最高测试剂量），表明其具有较大的安全边际。这些结果为KLPE作为人类食品的安全性提供了监管级别的证据，并支持其在全球市场上作为功能性食品和营养保健品的应用。

引言

青柠（Citrus aurantiifolia），也被称为墨西哥青柠、西印度青柠或埃及青柠，是一种广泛种植和消费的柑橘类水果。2023年全球青柠产量（所有品种）估计约为4.3亿吨（Jaganmohan, 2023）。它通常被加工成各种产品，包括果汁、果酱和果皮屑（Simanjuntak等，2022）。大部分青柠用于果汁生产，由此产生了大量的果皮副产品（Kaur等，2023）。

青柠果皮富含植物化学物质，如黄酮类、酚类、生物碱和柠檬苷，这些成分具有多种生物和药理活性（Chriscensia等，2020）。大量研究表明其具有抗氧化、抗菌、抗炎和抗癌特性，并暗示其在改善睡眠方面的潜在作用（Azman等，2019；Thonglem等，2023；Chriscensia等，2020；Kim等，2024）。将青柠果皮用作功能性食品可以通过减少果汁生产过程中的浪费并带来健康益处，同时实现环境可持续性（Rafiq等，2018；Mateus等，2023）。

传统上，青柠果皮主要用于烹饪，尤其是作为果皮屑和果酱成分，数百年来人们一直在食用而未出现显著的安全问题（FDA，2023；Amendt，2001；D’Sa，2004）。然而，富含黄酮类的青柠果皮乙醇提取物尚未被传统消费或系统评估。由于功能性食品的应用越来越依赖于此类浓缩制剂，因此需要进行严格的毒理学评估（Maqbool等，2023）。从监管角度来看，安全评估是商业化的先决条件，这符合美国FDA的新膳食成分（NDI）通知制度和韩国的健康功能性食品（HFF）审批系统要求。

迄今为止，尚未有关于青柠果皮乙醇提取物的全面毒性评估。据我们所知，本研究首次系统地、符合GLP要求地评估了青柠（C. aurantiifolia）果皮乙醇提取物（KLPE）的安全性。鉴于最近的临床前和临床研究结果表明其可能具有改善睡眠的作用（Kim等，2024；Kim等，2025），安全性验证对于支持这些新兴的功能性声明尤为重要。因此，毒理学评估不仅对于确保其作为功能性食品成分的安全性至关重要，也有助于符合国际监管要求。

在本研究中，我们通过急性口服毒性试验、为期90天的重复剂量研究（包含恢复期）以及体外和体内的遗传毒性试验，根据OECD测试指南（TGs 420、408、471、473、474）对KLPE的植物化学成分进行了表征和毒理学评估。这些结果为KLPE作为功能性食品和营养保健品的安心使用提供了监管级别的证据，并为其在全球监管框架中的应用提供了科学依据。

研究设计与合规性

所有毒性研究均在印度Vijayawada的Laila Nutraceuticals R&D中心进行。所有程序均遵循OECD测试指南（TGs 420、408、471、473、474）和良好实验室规范（GLP）要求（证书编号GLP/C-218/2023），并获得了印度科技部的批准。

KLPE及其测试溶液的制备和成分分析

KLPE（BENESOMNO?）由Nutra-it Inc.（韩国釜山）提供，是一种从烤制的食品级干青柠果皮中提取的水溶性乙醇提取物

急性毒性研究

剂量制备物被确认为均匀的，vicenin-2的浓度在标称值的80–120%范围内（补充表S1）。该毒性评估在2,000 mg/kg BW的剂量下进行，这是OECD为啮齿动物定义的最大剂量。在观察研究中，一只雄性和一只雌性大鼠在48小时内未出现任何临床症状或死亡。随后，另外四只雄性和四只雌性大鼠接受了相同的剂量。未观察到与处理相关的疾病、死亡或

讨论

青柠（Citrus aurantiifolia）果皮是一种富含黄酮的来源，含有多种生物活性植物化学物质（Liu等，2023）。乙醇提取法被广泛认为是从植物材料（包括柑橘类副产品）中分离黄酮类和酚类化合物的有效方法（Do等，2014；Kim & Lim，2020），因此用于制备青柠果皮乙醇提取物（KLPE）。随着柑橘类提取物在功能性食品和膳食补充剂中的使用日益增加

结论

这项符合GLP要求的研究首次全面评估了KLPE的毒性，包括急性口服毒性、90天重复剂量研究和遗传毒性研究，所有研究均符合OECD测试指南。在任何研究中均未发现KLPE的毒性证据，其口服LD₅₀超过2,000 mg/kg BW，NOAEL大于2,000 mg/kg BW/天。总体而言，这些结果为KLPE作为功能性食品和营养保健品的安心使用提供了监管级别的证据。

作者贡献声明

崔允珍：撰写——审稿与编辑、初稿撰写、方法学设计、数据管理、概念构思。赵成默：撰写——审稿与编辑、监督、资源协调、项目管理、概念构思。朴庆植：撰写——审稿与编辑。李美英：数据验证。金成辉：概念构思。金杜贤：初稿撰写

未引用的参考文献

OECD, 2001; OECD, 2018; OECD, 2020; OECD, 2016; OECD, 2016; Simanjuntak和Hermawan, 2022; 美国食品药品监督管理局, 2023; Zhong-Ze等, 2010.

利益冲突声明

作者声明不存在利益冲突。

数据可用性

数据可应要求提供。

伦理声明

所有动物实验程序均获得了机构动物护理和使用委员会（IACUC）的批准（批准编号：LN/IAEC/TOX/LN231101）。该研究遵循了OECD指南，并遵守国际公认的实验室动物护理和使用原则。

资金来源

本研究未接受公共、商业或非营利部门的任何特定资助。

利益冲突声明

作者声明不存在可能影响本文工作的已知财务利益或个人关系。