靶向CD59增强补体杀伤：铂耐药高级别浆液性卵巢癌抗体治疗新策略

《Scientific Reports》：Towards antibody-based immunotherapy development for platinum-resistant high-grade serous ovarian cancer

本研究针对铂耐药高级别浆液性卵巢癌(HGSOC)治疗难题，开发了基于S2抗体和CD59中和抗体Yth53.1的联合疗法。研究发现该方案能通过补体依赖性细胞毒性(CDC)有效杀伤不同HR状态和铂耐药性的HGSOC细胞系，为克服化疗耐药提供了新方向。

　　

在妇科恶性肿瘤的战场上，高级别浆液性卵巢癌(HGSOC)堪称最棘手的对手之一。作为卵巢癌中最常见且最具侵袭性的亚型，HGSOC每年在全球夺走约20万女性的生命。尽管手术联合铂类/紫杉醇化疗初期效果显著，但超过80%的晚期患者会在3年内复发，并发展为铂耐药疾病，导致治疗选择极其有限。

这种耐药性的产生与肿瘤细胞的自我防御机制密切相关。约半数HGSOC存在同源重组(HR)修复基因（如BRCA1/BRCA2）的功能缺失，这原本应使肿瘤对DNA损伤药物更敏感。然而，肿瘤细胞通过复杂机制逃避治疗，使得即使PARP抑制剂等靶向药物也对铂耐药患者效果有限。近年来，免疫检查点抑制剂(ICIs)在多种癌症中取得突破，但在卵巢癌的临床试验（如JAVELIN Ovarian 100、DUO-O、IMagyn050等）大多未能改善无进展生存期，凸显了开发新治疗策略的迫切性。

面对这一挑战，研究人员将目光投向了人体内天然存在的防御系统——补体系统。这一思路的创新之处在于利用抗体引导补体攻击肿瘤细胞，同时阻断肿瘤的免疫逃逸机制。特别是CD59分子，作为关键的膜补体调节蛋白(mCRP)，它能保护肿瘤细胞免受补体介导的溶解，是理想的干预靶点。

在这项发表于《Scientific Reports》的研究中，Zivile Giedraityte团队探索了联合使用S2抗体（靶向肿瘤抗原）和Yth53.1抗体（中和CD59）的策略，旨在重新激活补体系统对铂耐药HGSOC细胞的杀伤能力。

关键技术方法

研究团队选用了具有不同特征的HGSOC细胞系模型，包括OVCAR-3（上皮型，HR精通）、OVCAR-8（间充质型，HR缺陷）以及通过CRISPR-Cas9技术构建的BRCA2突变OVCAR-4克隆。通过逐步增加卡铂浓度诱导建立了铂耐药细胞系。核心实验技术包括：补体介导的细胞杀伤实验（使用正常人血清作为补体来源）、膜攻击复合物(MAC)形成的流式细胞术检测（采用抗C5b-9抗体）、细胞凋亡的定量分析（通过PE-Annexin V/7-AAD双染色）以及克隆形成实验验证铂耐药性。

研究结果

补体介导的HGSOC细胞杀伤效率

研究显示，S2抗体能有效激活补体系统，在60分钟内诱导显著的肿瘤细胞溶解。

当S2抗体浓度增加至3%(v/v)时，几乎所有HGSOC细胞系均观察到高达95%的杀伤率。尤为重要的是，这种杀伤效果不受细胞铂耐药状态或HR缺陷状态的影响。

Yth53.1增强补体杀伤效果

联合使用Yth53.1能显著增强补体杀伤效率。在铂耐药的OVCAR-8细胞系中，加入20μg/ml Yth53.1后，Annexin V和7-AAD双阳性细胞比例从90.2%提升至98.8%。

这表明中和CD59能有效解除肿瘤细胞的补体抵抗机制，促进膜攻击复合物的形成。

铂耐药与敏感细胞杀伤效率无显著差异

统计分析显示，在单独使用S2抗体或联合Yth53.1的条件下，铂耐药与敏感细胞系的杀伤效率无统计学显著差异（曼-惠特尼U检验p值分别为0.5382和0.7930）。

这一发现表明，与铂类化疗不同，补体介导的杀伤机制能有效绕过肿瘤细胞的化疗耐药途径。

膜攻击复合物形成验证

通过特异性抗C5b-9抗体检测，研究证实了补体激活后膜攻击复合物在肿瘤细胞表面的沉积。

即使仅使用0.1%(v/v)的S2抗体，也能诱导显著的MAC形成，而热灭活血清处理组则完全无细胞溶解现象，证实了补体特异性杀伤。

与传统化疗的敏感性对比

与抗体治疗相比，铂耐药细胞系对卡铂的敏感性显著降低。

如OVCAR-8铂耐药细胞的IC₅₀值(3.215μM)显著高于敏感细胞(1.069μM)，而抗体治疗则能同等有效地杀伤两类细胞。

研究结论与意义

本研究证实了基于补体激活的抗体疗法对铂耐药HGSOC的治疗潜力。通过联合使用S2抗体和CD59中和抗体Yth53.1，研究人员成功克服了肿瘤细胞的补体抵抗机制，实现了高效的特异性杀伤。这种杀伤效果不依赖于细胞的HR状态或铂耐药性，为解决化疗耐药这一临床难题提供了新思路。

特别值得注意的是，腹腔内局部给药的策略充分利用了卵巢癌的病理特点。卵巢癌主要局限于腹腔传播，这为局部递送抗体和补体成分创造了理想条件，可能最大化治疗效果同时减少全身毒性。

尽管研究存在一定局限性（如S2抗体的特异性需进一步验证，缺乏体内实验数据），但这项工作为开发下一代卵巢癌免疫疗法奠定了重要基础。未来研究方向包括开发针对卵巢癌特异性抗原（如CA125、HE4）的补体激活抗体，探索与化疗、靶向治疗的协同作用，以及基于患者肿瘤浸润B细胞产生个体化治疗抗体。

这项研究的重要意义在于它开辟了一条绕过传统耐药机制的新途径，通过重新武装人体天然免疫系统来攻击即使是最顽固的卵巢癌细胞，为铂耐药HGSOC这一临床难题带来了新的希望。