福尔马林固定细针穿刺样本辅助检测验证：从最低限度到最大化的方法学突破

《American Journal of Clinical Pathology》：Validation of ancillary procedures on formalin liquid fixed aspiration cytologic samples: from minimum to maximum

本研究针对福尔马林固定细针穿刺(FNA)样本辅助检测标准化难题，开发并验证了替代性液基细胞学(aLBC)与琼脂糖细胞块(CB)制备技术。通过18例乳腺癌样本的系统性比对，证实两种方法对10种免疫标志物（包括HER2、ER、PR等）及HER2 FISH检测的灵敏度、特异度、预测值和准确度均达100%，为低细胞量样本的精准诊断提供了经济高效的标准化方案。

　　

在精准医疗时代，病理诊断对肿瘤样本的生物标志物检测提出了更高要求。然而临床实践中，通过细针穿刺(FNA)获得的样本往往存在细胞量少、固定方式不统一等问题，尤其当样本仅能进行福尔马林液体固定时，如何保证后续免疫组织化学(IHC)和分子检测的可靠性成为突出难题。传统酒精固定的液基细胞学标本虽能保持形态学特征，但与常规福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)组织切片在IHC检测中存在显著差异，导致结果判读困难。更棘手的是，现有指南要求实验室对每种细胞学制备方法进行独立验证，但低细胞量样本的标准化处理方案始终缺位。

为突破这一瓶颈，匈牙利佩奇大学研究团队以乳腺癌为模型，开展了一项方法学验证研究。他们创新性地将福尔马林固定的FNA样本同步制备为琼脂糖基细胞块(CB)和替代性液基细胞学(aLBC)标本，并与同期采集的FFPE组织标本进行系统性比对。该研究设计巧妙之处在于，每个病例均能获得三种不同制备方式的匹配样本，为方法学验证提供了理想的对照体系。

研究团队主要采用了三项关键技术：首先是样本制备环节，针对福尔马林固定的FNA样本，建立了标准化的琼脂糖细胞块制备流程，通过12步脱水透明浸蜡程序确保细胞完整性；同时开发了滴注重吸收单层干燥制备法(DReaMDP)，在硅烷化玻片上形成直径3毫米的细胞富集区。其次是检测平台搭建，选用10种具有代表性的免疫标志物（涵盖核、膜、胞浆不同定位），严格按照临床验证的IHC流程操作；针对HER2检测，更同步进行IHC评分和双探针FISH分析，严格遵循2023年ASCO/CAP指南。最后是质量控制系统，通过双盲病理评估、Cohen's K一致性分析（κ>0.75为可接受）和多种统计校验方法，确保结果判读的客观性。

材料与方法学验证

研究纳入2024-2025年18例乳腺癌FNA样本，所有病例均成功制备CB和aLBC标本。质量控制显示两种制备方法均能保持细胞形态完整性，H&E染色证实所有样本满足后续实验要求。关键的细胞数量阈值方面，CB制备需≥50,000个细胞，而aLBC技术仅需1,000-3,000个细胞即可进行辅助检测，显著提升低细胞量样本的利用率。

免疫组化一致性分析

10种免疫标志物的检测结果显示完美一致性：HER2、CK7、Ki-67、P40、GATA3在细胞数量评分和染色强度上均与FFPE组织完全匹配；CK5、E-cadherin和BerEp4在个别病例中出现轻微定量差异（1-3个四分位数），但未影响阴阳性判读。特别值得注意的是，激素受体检测中ER的Allred评分显示完全一致(κ=1.0)，PR评分虽存在微小波动(κ=0.841-0.922)，但未改变临床分类。所有标志物的灵敏度、特异度、阳/阴性预测值和准确度均达到100%。

HER2综合评估

HER2 IHC评分在CB标本上完全适用，14例为0分阴性，1例1+阴性，3例3+阳性，与组织学结果完全对应。更令人信服的是，HER2 FISH分析在细胞学制备与组织切片间呈现完美匹配(κ=1)，15例FISH阴性与3例FISH扩增病例在所有材料中结果一致，证实该方法可用于治疗靶点检测。

讨论与临床意义

本研究首次系统验证了福尔马林固定FNA样本的标准化处理流程。相较于传统酒精固定方法，福尔马林固定能更好保持抗原完整性，避免IHC假阴性风险。两种制备技术各有优势：CB提供类组织结构有利于形态评估，aLBC则极大降低细胞量需求且便于自动化操作。值得注意的是，研究团队在超过3,800例临床样本中应用此技术体系，年完成约1,220例IHC和90例HER2 FISH检测，证实其临床实用性。

结论

该验证研究确立的福尔马林固定FNA样本处理方案，成功解决了细胞学样本辅助检测的标准化难题。aLBC和CB制备方法不仅经济高效，更重要的是在IHC和FISH检测中展现出与组织学标本等效的可靠性。这一技术体系为分子病理诊断提供了新范式，使微量样本也能完成综合生物标志物分析，特别适用于转移灶活检和新辅助治疗前的快速诊断。随着精准医疗需求的持续增长，这种标准化样本处理方法有望成为细胞病理学实验室的质控新标准。