使用LC–MS/MS和LC–Orbitrap–HRMS技术对大鼠和人类肝微粒体中的西拉替尼（Sitravatinib）进行代谢谱分析

《RAPID COMMUNICATIONS IN MASS SPECTROMETRY》：Metabolic Profiling of Sitravatinib in Rat and Human Liver Microsomes Using LC–MS/MS and LC–Orbitrap–HRMS

Sitravatinib代谢稳定性和LC-MS/MS平台开发研究通过Waters ACQUITY BEH C18色谱柱分离，正离子电喷雾离子源检测，建立高灵敏度代谢物分析方法。结果显示大鼠肝微粒体中Sitravatinib半衰期仅17.47分钟，产生M3和M5两种主要代谢物，而人肝微粒体代谢稳定性显著提升至96.06分钟，仅检测到7种次要代谢物。该研究首次整合LC-MS/MS与Orbitrap-HRMS平台，系统揭示了Sitravatinib在O-脱甲基化、酰胺形成等关键代谢途径中的差异特性，为药物代谢研究提供标准化技术方案。

　　

摘要

研究背景

西拉替尼（Sitravatinib）是一种受体酪氨酸激酶抑制剂，被开发用于治疗晚期非小细胞肺癌（NSCLC）和尿路上皮癌。本研究旨在建立一个集成型LC–MS/MS及LC–Orbitrap–HRMS分析平台，以评估西拉替尼在大鼠和人类肝微粒体中的代谢稳定性并分析其代谢产物。

方法

分离采用Waters ACQUITY BEH C18色谱柱，流动相为0.1%甲酸水溶液和乙腈的梯度混合物。检测方法为正电喷雾离子化技术，并通过多反应监测（multiple reaction monitoring）来检测西拉替尼的m/z 630.2 → 555.2以及内标的m/z 502.5 → 323.2峰。代谢产物的鉴定通过LC–Orbitrap–HRMS结合全扫描质谱（full-scan MS）和串联质谱（dd-MS2）技术以及平行反应监测来完成。代谢产物的结构通过精确质量测定和MS2碎片信息进行解析。

结果

LC–MS/MS方法在1.0–2000 nM的浓度范围内表现出优异的线性，适用于高通量体外实验。西拉替尼在大鼠肝微粒体中的代谢稳定性较差（t1/2 = 17.47 ± 2.57分钟），共鉴定出7种代谢产物，其中M3和M5为主要代谢物。相比之下，西拉替尼在人类肝微粒体中的代谢稳定性较高（t1/2 = 96.06 ± 12.17分钟），仅检测到7种次要代谢产物。

结论

主要的代谢途径包括O-去甲基化、酰胺形成、N-去烷基化和氧化脱氨作用。本研究首次建立了用于西拉替尼体外代谢分析的集成LC–MS/MS和HRMS分析策略。

利益冲突

作者声明没有利益冲突。

数据获取

本研究的数据可向通讯作者索取。

同行评审

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