高通量UHPLC-MS/MS方法在鸡血清和鸡蛋中多霉菌毒素检测的优化验证与暴露评估

《Mycotoxin Research》：Optimization and validation of a targeted high-throughput UHPLC-MS/MS method for the analysis of multiple mycotoxins in chicken serum, egg yolk and white

本刊推荐：为解决动物饲料中霉菌毒素污染向鸡蛋等食品转移带来的健康风险，研究人员优化并验证了一种高通量UHPLC-MS/MS方法，可同步检测鸡血清、蛋黄和蛋清中38种霉菌毒素（定量分析30/29/29种）。该方法采用Oasis? Ostro磷脂去除技术，4小时内完成96例样本前处理，定量限达0.05-2.5 μg/kg，在线性范围（血清0.05-200 ng/mL，蛋基质0.05-20 μg/kg）内呈现良好准确性（偏差≤±30%）。通过对埃塞俄比亚农场样本的实证分析，成功检出TEA、OTA等关键毒素，为禽类生物监测与食品安全风险评估提供了关键技术支撑。

　　

霉菌毒素是真菌产生的次级代谢产物，在谷物饲料中难以避免，并通过食物链进入动物源性食品。当禽类摄入污染饲料后，霉菌毒素可能以原型或代谢物形式残留于鸡蛋和血清中，最终威胁人类健康。目前欧盟虽对部分霉菌毒素设定限量标准，但鸡蛋中尚未建立专门限值，且新兴霉菌毒素如恩镰孢菌素(ENNs)、交链孢霉毒素等缺乏监管。更复杂的是，多种霉菌毒素共污染可能产生协同毒性效应，而传统免疫分析法存在交叉反应性强、半定量等局限。因此，开发能同步检测多种霉菌毒素的高灵敏度分析方法，成为保障禽类健康和食品安全的关键挑战。

本研究发表于《Mycotoxin Research》，旨在建立一种适用于鸡血清、蛋黄和蛋清的高通量UHPLC-MS/MS检测方法。研究人员通过优化样本前处理流程，采用0.1%甲酸乙腈液萃取结合Oasis? Ostro 96孔板同步去除蛋白质和磷脂，将样本处理时间缩短至4小时/96样本。色谱分离使用Acquity Premier BEH C18柱，以0.1%乙酸水溶液/甲醇为流动相进行梯度洗脱，质谱采用电喷雾离子源极性切换模式和多反应监测(MRM)技术，并引入13C标记同位素内标校正基质效应。方法验证严格遵循欧盟指南，线性范围覆盖血清0.05-200 ng/mL、蛋基质0.05-20 μg/kg，相关系数r≥0.99。

方法学优化与验证结果

样本前处理方面，血清采用100 μL样本体积，蛋基质分离蛋黄与蛋清分别分析。通过对比HSS-T3色谱柱，最终选择BEH C18柱以改善TEA的峰形。尽管柠檬素(CIT)和双氢柠檬素(HO-CIT)出现峰展宽现象，但通过MRM特异性过渡离子实现了ZAN与α-ZEL的区分。验证数据显示，所有分析物的日内/日间准确度偏差控制在-30%至+20%，精密度RSD≤20%。蛋黄中回收率为68.1-87.8%（除CIT、DON-GlcA等极性化合物外），蛋清基质效应更为显著，但经同位素内标校正后，信号抑制/增强(SSE)控制在80-120%范围内。

实际样本检测结果

对埃塞俄比亚13个农场的80份血清和21个农场的160枚鸡蛋样本进行分析发现：

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  血清中TEA和OTA检出率最高，平均浓度分别为1.25±1.81 ng/mL和0.01±0.12 ng/mL，提示这两种毒素在禽体内吸收充分且半衰期较长。
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  鸡蛋中霉菌毒素残留以痕量水平为主（86份蛋黄和61份蛋清样本检出低于定量限值），其中ENNB和BEA在蛋黄中超标率最高（均值0.13±0.05 μg/kg），蛋清中BEA、AFB1、DON等有零星超标。
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  黄曲霉毒素分布研究表明，AFB1仅在个别蛋黄（最高0.10 μg/kg）和蛋清（0.08 μg/kg）样本中超标，均低于欧盟2 μg/kg的限量标准。
  

讨论与结论

本研究首次实现了鸡蛋基质中29种霉菌毒素及其代谢物的同步定量分析，血清检测种类扩展至30种。方法通过磷脂去除技术有效克服了鸡蛋高脂质基质的干扰，定量限低至0.05 μg/kg，较同类研究提升10倍灵敏度。实际应用证实，该方法能精准反映禽类通过饲料暴露霉菌毒素的真实情况，其中TEA和OTA在血清中的高检出率与其已知药代动力学特征吻合，而鸡蛋中ENNB/BEA的残留模式提示这类新兴毒素可能存在组织特异性蓄积。该技术平台为禽类养殖业的霉菌毒素风险监控提供了关键工具，未来可进一步用于评估毒素从饲料到食品链的转移规律，为制定鸡蛋中霉菌毒素限量标准提供科学依据。