为了优化使用D5F3克隆的免疫组化染色方案，并确保检测结果的准确性，需要对间变性淋巴瘤激酶（ALK）免疫组化结果进行正交验证，并结合分子分析来检测ALK基因的重排情况。这一过程对于外部质量评估也具有重要意义

《Virchows Archiv》：Orthogonal validation of anaplastic lymphoma kinase (ALK) immunohistochemistry with molecular analysis for ALK gene rearrangement is required to finetune staining protocols with the D5F3 clone and can impact external quality assessment

本研究对三种ALK免疫组化（IHC）检测协议进行多实验室验证，通过462例肿瘤的IHC结果与分子数据对比，发现较低敏感性的协议具有更高特异性（85%），但外部评估认为其敏感性不足。研究指出，过度敏感的IHC方法可能导致假阳性，增加分子检测冗余，建议优化IHC协议并与分子数据比对。

　　

摘要

免疫组化（IHC）用于检测间变性淋巴瘤激酶（ALK）以筛查肿瘤中的ALK基因重排，这些重排通常会导致ALK蛋白过表达，具体取决于融合伴侣。本研究使用D5F3克隆对三种IHC方案进行了实验室间验证。作为内部质量评估的一部分，将ALK IHC结果与462个肿瘤的ALK融合分子数据进行了回顾性比较。ALK IHC结果被分为“阴性”、“不确定”或“阳性”。两种ALK IHC方案在阑尾肌间神经丛中显示出增强的染色强度，但它们也在大多数无ALK重排的上皮和间充质肿瘤中引入了弥漫性的、微弱的细胞质染色，导致ALK IHC结果呈现为不确定或假阳性。另一种敏感性较低的方案具有更高的特异性，因为它与分子数据的一致性较好，且背景染色不明显：34个ALK重排肿瘤中有33个被检测为阳性（灵敏度为97%），428个无ALK融合的病变中有363个被检测为阴性（特异性为85%）。阴性预测值和阳性预测值分别为99%和34%。在58个结果不确定的肿瘤中，有3个（5%）实际存在ALK重排，而在40个阳性肿瘤中，这一比例为30个（75%）。尽管该方案与ALK重排具有良好的一致性，灵敏度较高，但外部质量评估仍认为其灵敏度不足。我们的验证研究表明，过于敏感的ALK IHC检测方法可能会导致难以识别的局灶性或弥漫性弱免疫反应的假阳性结果，从而可能过度使用确认性分子检测。因此，我们建议通过将ALK IHC检测的结果与分子数据进行比较，仔细调整使用D5F3克隆的ALK IHC检测方法。