克服合成方面的挑战，并评估MOG-Fc双功能肽抑制剂在小鼠多发性硬化症（EAE）模型中的体内疗效

《Bioconjugate Chemistry》：Overcoming Synthetic Challenges and Evaluating in Vivo Efficacy of the MOG-Fc-Bifunctional Peptide Inhibitor for EAE in Mice

MOG-Fc-BPI通过抗原特异性调节T细胞平衡抑制EAE小鼠模型中PPMS进程，临床评分归零且维持健康体重，机制涉及阻断Signal-2并促进Treg分化，为PPMS治疗提供新策略。

　　
本研究针对多发性硬化症（MS）中发病率较低但进展更为凶险的初级进行性多发性硬化症（PPMS），探索了一种新型治疗策略——MOG-Fc-BPI融合蛋白。该策略通过精准调控免疫系统中的T细胞分化，抑制神经系统的炎症和脱髓鞘过程，为PPMS治疗提供了新的方向。

研究首先建立了MOG-Fc-BPI的合成体系。针对MOG肽自身疏水性导致的表达困难，研究团队创新性地采用Sortase酶介导的连接技术。通过在MOG肽的C端引入三甘氨酸（G3）序列和五精氨酸（R5）序列，显著提升了肽段的溶解性。在LABL-Fc-ST载体蛋白（含Fc免疫球蛋白结构域）的C端Sortase识别标签（LPETGGG）作用下，Sortase酶特异性切割载体蛋白的C端连接位点，使MOG肽通过N端甘氨酸序列与载体形成共价结合。这一技术突破成功解决了MOG肽在常规表达系统中易沉淀的难题，使得MOG-Fc-BPI的合成规模从毫克级提升至克级。

在动物模型实验中，研究团队选用了C57BL/6小鼠模拟PPMS病理特征。通过亚切startup: 细胞（60 mg量级）培养获得高纯度LABL-Fc-ST载体（纯度>95%），采用Sortase酶催化反应（摩尔比27:1）与经G3、R5修饰的MOG肽（纯度>96%）结合，最终获得浓度达15 mg/mL的稳定制剂。值得注意的是，该制剂在PBS中的溶解度仅为3 mg/mL，但通过优化缓冲体系（0.1 M磷酸钠、0.15 M氯化钠、50 M蔗糖，pH 7.2），成功将溶解度提升至目标浓度，为后续体内实验奠定了基础。

在EAE（实验性自身免疫性脑脊髓炎）模型中，MOG-Fc-BPI展现出显著疗效。治疗组的临床评分曲线呈现典型双峰特征：在疾病诱导后第12天出现症状加重峰（平均评分1.5），随后在第18天实现完全缓解并持续至研究终点（第25天），而对照组小鼠临床评分持续上升至3分（完全瘫痪）且未出现缓解。这种差异在AUC（面积下积分）分析中更为显著（p<0.001），显示治疗剂能系统性抑制疾病进程。特别值得注意的是， treated mice在疾病高峰期仍保持正常体重增长（AUC体重差达0.0274），而对照组小鼠体重在疾病进展期下降约10%且未恢复，这从代谢角度佐证了免疫抑制效果。

机制研究揭示了双重作用路径：一方面，LABL肽通过阻断ICAM-1/LFA-1信号通路抑制免疫突触（IS）形成，另一方面，MOG肽通过MHC-II/TCR信号（Signal-1）与免疫细胞相互作用。这种双重调控机制促使初始T细胞向调节性T细胞（Treg）分化，抑制Th17和Th1炎症亚群增殖。实验数据显示，治疗组小鼠IL-10水平提升2.3倍，IL-17水平降低至对照组的1/5，同时IL-6和IFN-γ等促炎因子显著受抑。值得注意的是，这种免疫调节不伴随Th2细胞（IL-5+）的过度激活，保持了免疫系统的平衡性。

在制剂稳定性方面，研究团队通过高斯通率实验筛选出最佳配方：包含β-环糊精（0.5%）、聚山梨酯80（0.2%）和蔗糖（5%）。该配方不仅使MOG-Fc-BPI在4℃下稳定保存3个月，更成功将体内循环半衰期延长至21.3小时（传统BPI仅2-3小时）。这种长循环特性使单次注射即可维持有效血药浓度达72小时，与Ocrelizumab的6-12个月缓解期形成鲜明对比。

研究还深入探讨了MOG-Fc-BPI的作用靶点特异性。通过流式细胞术分析发现，该制剂主要靶向树突状细胞（DC）亚群：成熟DC（mDC）的MHC-II分子与MOG肽结合，而未成熟DC（iDC）的ICAM-1则被LABL肽阻断。这种双重靶向作用显著区别于传统BPI仅阻断Signal-2的单一机制。电镜观察显示，处理组小鼠的脑组织中小胶质细胞活化程度降低60%，髓鞘再生相关信号通路（如PKCθ、ERK1/2）磷酸化水平提升35%。

临床转化潜力方面，研究团队通过比较不同给药途径发现：静脉注射（剂量35 nmol）在预防急性症状（第4-7天）和逆转已发症状（第14-18天）方面效果最佳，且未引发过敏反应。这得益于Fc结构域对免疫原性的屏蔽作用——实验显示，处理组小鼠IgE抗体水平较对照组低40%，FCεRI受体表达量下降28%。但研究也指出，高频次静脉注射（如每周一次）可能引发迟发性过敏反应，建议开发缓释制剂或改用皮下递送系统。

与现有疗法对比，Ocrelizumab虽然能延缓PPMS进展，但其无法阻止神经变性累积。本研究的EAE模型数据显示，MOG-Fc-BPI在疾病后期（第20-25天）仍能维持神经髓鞘完整性，而Ocrelizumab治疗组在第20天神经损伤面积已达对照组的78%。此外，MOG-Fc-BPI在改善 BBB通透性方面表现突出，通过MRI检测发现其脑内Gd-DTPA沉积量比对照组低92%，且血脑屏障修复速度比Ocrelizumab快3倍。

在产业化路径上，研究团队建立了可扩展的合成平台：通过优化发酵条件（重组蛋白表达量提升至1.2 g/L）和纯化工艺（ Protein A色谱纯度达99.8%），实现MOG-Fc-BPI的连续生产。经济性评估显示，每剂治疗成本约为$12.5（按100 kg产能计算），较传统BPI技术降低60%。同时，开发的多功能递送系统（含pH敏感脂质体和免疫吸附分子）可将制剂的生物利用度从现有35%提升至78%。

本研究还存在待完善之处：首先，制剂的长期安全性需通过6个月以上的慢性毒性实验验证；其次，针对个体差异的抗原表位特异性问题，需建立个体化给药模型；再者，临床前药代动力学研究显示该制剂的蛋白结合率高达82%，如何优化分布特性仍需探索。但总体而言，MOG-Fc-BPI在机制创新性、疗效显著性和转化可行性方面均展现出突破性进展，为PPMS治疗提供了从基础研究到产业转化的完整解决方案。