《Clinica Chimica Acta》：Rapid identification and quantification of residual daratumumab in multiple myeloma patients by MALDI - TOF mass spectrometry
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本研究开发了一种基于快速MALDI-TOF质谱的iMS-LC检测方法，用于区分达雷妥珠单抗与多发性骨髓瘤患者血清中的M蛋白，在38例患者中检测准确率达94.7%，并验证了其高精密度和灵敏度。
罗厚龙|丁焕|陈帆|王宇曦|周琳|叶鹏|于辉|吴尚英|谢伟基|纪瑞|黄嘉彤|苏振平|徐安平|季玲
北京大学深圳医院实验室医学部，中国广东省深圳市518036
摘要
背景
抗CD38单克隆抗体的引入，包括达妥珠单抗，显著提高了多发性骨髓瘤（MM）的响应率和生存率。然而，这些治疗性单克隆抗体（t-mAbs）会干扰用于检测和定量内源性单克隆蛋白（M-proteins）的传统电泳技术，给治疗反应评估带来了挑战。
方法
我们系统评估了一种无需富集的快速MALDI-TOF质谱系统（iMS-LC Assay），通过分析38名接受达妥珠单抗治疗的多发性骨髓瘤（MM）患者的连续血清样本，来评估其区分达妥珠单抗和M-proteins的能力。此外，通过向人血清中添加达妥珠单抗，我们确定了m/z参考范围，并评估了该检测方法的分析精度、检测限（LOD）和定量能力。
结果
iMS-LC Assay能够以平均m/z值23,384.63（平均值±3SD：23,370–23,398）一致地识别达妥珠单抗，显示出高分析精度（CV≤2.8%）和0.10至0.15 ng/L的检测限（LOD）。在90.55%（182/201）的患者样本中检测到达妥珠单抗，并在94.7%（36/38）的患者中将其与内源性M-proteins区分开来。当M-protein的m/z值接近达妥珠单抗且浓度较高时，区分t-mAbs和M-proteins变得具有挑战性。
结论
iMS-LC Assay在大多数临床环境中能够实现达妥珠单抗和M-proteins的特异性、敏感性和自动化区分，为监测接受抗CD38治疗的多发性骨髓瘤患者的治疗反应提供了实用的替代方案。
引言
多发性骨髓瘤（MM）的特点是恶性浆细胞的克隆增殖以及单克隆免疫球蛋白（M-proteins）的产生，这些蛋白是诊断、风险分层和治疗反应监测的关键生物标志物[1,2]。国际骨髓瘤工作组（IMWG）将血清蛋白电泳（SPE）和免疫固定电泳（IFE）指定为检测和定量M-proteins的标准方法[3]。然而，这些技术存在显著局限性，包括灵敏度较低（SPE的检测限约为2.0 ng/L，IFE为0.25 ng/L），以及无法可靠地区分具有相同免疫型和电泳迁移模式的内源性M-proteins和治疗性单克隆抗体（t-mAbs）[4,5]。
抗CD38单克隆抗体的引入，特别是达妥珠单抗（一种IgG-κ单克隆抗体），彻底改变了多发性骨髓瘤（MM）的治疗方式，显著提高了响应率和生存率[6,7]。然而，达妥珠单抗会严重干扰血清蛋白电泳（SPEP）和免疫固定电泳（IFE），经常与内源性IgG-κ M-proteins共迁移。这种干扰可能导致将残留的达妥珠单抗误认为是持续存在的疾病或新的恶性克隆，从而在临床试验和实际治疗中低估完全缓解（CR）的情况并高估非常好的部分缓解（VGPR）[5,8]。因此，准确区分达妥珠单抗和内源性M-proteins至关重要，尤其是对于IgG-κ MM患者。
目前减轻这种干扰的策略，如达妥珠单抗特异性Hydrashift Assay，虽然有效，但存在固有的缺点：它们具有药物特异性（目前仅适用于达妥珠单抗和伊沙妥昔单抗），增加了实验室工作流程的复杂性及成本，并保留了基于凝胶的电泳的分析局限性[9,10]。显然需要一种通用的、高通量的方法，能够在不同患者群体中区分治疗性单克隆抗体（t-mAbs）和内源性M-proteins。
基于质谱（MS）的策略通过利用免疫球蛋白轻链的独特分子质量，为解决t-mAb干扰问题提供了有希望的解决方案[11, [12], [13]]。在各种MS平台中，基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）被认为是一个特别合适的选择。它比电泳具有更高的分析特异性，比液相色谱-质谱（LC-MS）更高的样本通量，并且兼容自动化[13,14]。在本研究中，我们对一种基于快速MALDI-TOF MS的系统（iMS-LC Assay）进行了全面评估，用于同时检测和定量接受含达妥珠单抗治疗方案治疗的MM患者连续血清样本中的达妥珠单抗和内源性M-proteins。我们还评估了其在不同M-protein亚型中的分析性能和临床适用性。
试剂
单克隆免疫球蛋白检测试剂盒购自Intelligene Biosystems Co., Ltd.（中国青岛）。抗CD38抗体（达妥珠单抗）购自APExBIO（美国休斯顿，F1370，1 mg/mL）。正常人血清（NHS）购自北方伟业计量集团有限公司（北京JS16020）。
样本
血清样本来自北京大学深圳医院接受达妥珠单抗治疗的38名MM患者，所有程序均获得机构审查委员会的批准。
添加了达妥珠单抗的人血清中达妥珠单抗的m/z值参考范围
在所有20次重复实验中，iMS-LC Assay在平均m/z值23,384.63处检测到达妥珠单抗κ轻链峰谱，这与达妥珠单抗预期的m/z范围一致。m/z值的范围为23,370至23,398（平均值±3SD）。此外，在添加了达妥珠单抗的人血清或HHS中，达妥珠单抗κ轻链峰的平均m/z值没有统计学上的显著差异（图2）。因此，可以应用相同的标准
讨论
达妥珠单抗是一种来自詹森公司的人源IgG1 κ（IgG1-κ）单克隆抗体（mAb），它结合CD38（一种首创靶点）[20]。它用于治疗MM，同时也正在开发用于治疗淋巴瘤、白血病和系统性AL淀粉样变性。准确区分达妥珠单抗和内源性M-proteins仍然是MM管理中的一个关键挑战。本研究表明，基于MALDI-TOF MS的iMS-LC Assay提供了高度
研究资助
本工作得到了北京大学深圳医院研究基金会 [资助编号JCYJ2021008]、广东省中南山医学基金会 [资助编号ZNSXS-20240108]、深圳市科技创新计划 [资助编号JCYJ20240813120000002]和广东省临床医学研究中心（2023B110008）的支持。
CRediT作者贡献声明
罗厚龙：撰写——原始草案、方法学、资金获取、数据管理、概念构思。丁焕：撰写——原始草案、方法学、数据管理。陈帆：数据管理。王宇曦：方法学。周琳：项目管理。叶鹏：数据管理。于辉：资源协调。吴尚英：方法学。谢伟基：项目管理。纪瑞：数据管理。黄嘉彤：项目管理。苏振平：数据管理。徐安平：撰写——审稿与编辑，
利益冲突声明
作者声明他们没有已知的可能会影响本文报告工作的财务利益或个人关系。
