芪参益气滴丸通过激活HDAC3介导的Nrf2-PITX2信号通路，减轻小鼠的氧化应激并缓解心肌梗死损伤

《Chinese Journal of Integrative Medicine》：Qishen Yiqi Dripping Pills Activate HDAC3-Mediated Nrf2-PITX2 Signaling Pathway to Reduce Oxidative Stress and Alleviate Myocardial Infarction Injury in Mice

中药Qishen Yiqi Dripping Pill（QSYQ）通过抑制HDAC3并激活Nrf2/PITX2抗氧化通路减轻心肌梗死氧化损伤，关键活性成分 cryptotanshinone 与HDAC3高亲和结合。

　　

摘要

目的

明确Qishen Yiqi滴丸（QSYQ）抑制心肌梗死（MI）中氧化应激损伤的机制，重点验证其作用是否通过组蛋白去乙酰化酶3（HDAC3）/核因子红系2相关因子2（Nrf2）/配对样同源结构域转录因子2（PITX2）通路介导，并最终确定其活性成分。

方法

将小鼠随机分为6组，每组10只：对照组、模型组、QSYQ-L组（19.5 mg/kg）、QSYQ-M组（39 mg/kg）、QSYQ-H组（78 mg/kg）以及美托洛尔组（19.5 mg/kg）。通过永久性结扎左前降支冠状动脉建立心肌梗死小鼠模型。实验组（QSYQ组和美托洛尔组）在手术后每天给予相应药物，持续7天。通过超声心动图、心电图和激光散斑血流测定法纵向评估心脏功能。通过苏木精-伊红染色评估心肌损伤，使用三苯基四唑氯盐和伊文斯蓝双重染色法确定梗死大小和风险区域，通过酶联免疫吸附测定法分析心肌肌钙蛋白I（cTnI）、肌酸激酶心肌带（CK-MB）和脂质过氧化（LPO）。利用高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱法分析QSYQ及其代谢物的化学成分，并通过网络药理学预测其潜在靶点。通过共免疫沉淀和免疫荧光分别确认关键蛋白质相互作用和定位。通过分子对接和H9c2细胞中的体外氧-葡萄糖剥夺/再氧合模型，以及细胞热位移测定法（CETSA）和药物亲和力响应靶点稳定性（DARTS）测定进一步验证靶点结合情况。

结果

QSYQ给药显示出显著的心脏保护作用，显著减少了心肌梗死面积并减轻了病理组织损伤。同时，它改善了心脏功能参数，尤其是射血分数和分数缩短率，并提高了心肌灌注效率（P<0.01）。网络药理学分析表明，氧化应激调节是主要的治疗机制。在分子水平上，QSYQ有效抑制了HDAC3的表达，同时激活了Nrf2/PITX2抗氧化通路。通过共免疫沉淀和结构分析确认形成了HDAC3-Nrf2-PITX2调控复合物。关键的是，QSYQ中的核心生物活性成分隐丹酮对HDAC3表现出高亲和力结合（P<0.01），这一点通过CETSA和DARTS实验得到了验证。

结论

QSYQ通过抑制HDAC3来缓解心肌梗死损伤，从而部分激活Nrf2/PITX2信号通路并抑制氧化应激损伤。从机制上看，隐丹酮被确定为直接作用于HDAC3以发挥这种心脏保护作用的关键分子实体。