荔枝（Litchi chinensis Sonn.）种子的总黄酮类化合物通过抑制细胞凋亡（PANoptosis）来改善肝纤维化

《Chinese Journal of Integrative Medicine》：Total Flavonoids of Litchi chinensis Sonn. Seed Improves Hepatic Fibrosis by Inhibiting PANoptosis

本研究探讨荔枝种子总黄酮（TFLS）治疗肝纤维化（HF）的机制，通过体内外实验发现TFLS抑制ZBP1激活，调控凋亡、炎症小体相关pyroptosis及necroptosis，改善肝功能与纤维化。

　　

摘要

目的

研究荔枝（Litchi chinensis Sonn.）种子的总黄酮（TFLS）在体内（in vivo）和体外（in vitro）对肝纤维化（HF）的治疗效果及其可能的机制。

方法

本研究采用了四氯化碳（CCl₄）诱导的大鼠肝纤维化模型以及转化生长因子β1（TGF-β1）刺激的肝星形细胞（HSC-T6）细胞。在体内实验中，通过随机数表方法将大鼠随机分为6组：对照组、CCl₄组、水飞蓟素（50 mg/kg）组以及低剂量（25 mg/kg）、中剂量（50 mg/kg）和高剂量（100 mg/kg）TFLS组。在CCl₄诱导期间，每天通过灌胃给予TFLS或水飞蓟素，持续8周。在体外实验中，HSC-T6细胞被分为4组：对照组、TGF-β1（20 ng/mL）组、TGF-β1 + Z-DNA结合蛋白1（ZBP1）siRNA（si-ZBP1）组、TGF-β1 + 低剂量（80 μg/mL）TFLS组以及TGF-β1 + 高剂量（160 μg/mL）TFLS组。使用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清中的丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、羟脯氨酸（HYP）、总胆汁酸（TBA）、白细胞介素（IL）-1β、IL-18、IL-6和肿瘤坏死因子（TNF）-α水平。采用苏木精-伊红染色和Masson三色染色法对肝组织进行组织学检查。通过TUNEL技术评估细胞凋亡情况。通过免疫组化方法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（CASP）-8、NLR家族pyrin结构域包含蛋白3（NLRP3）、gasdermin D（GSDMD）和受体相互作用蛋白激酶（RIPK）3的表达。利用定量实时聚合酶链反应（qRT-PCR）检测CASP-8、NLRP3、GSDMD、CASP-3、BCL-2、BCL-2相关X蛋白（BAX）、ZBP1、RIPK1和RIPK3的mRNA水平。通过Western blot检测与PANoptosis相关的蛋白质。

结果

在CCl₄诱导的肝纤维化大鼠中，TFLS改善了肝功能、炎症反应和肝组织纤维化（P<0.05 或 P<0.01）。TFLS抑制了PANoptosis的启动因子ZBP1的激活，进而通过增加BAX和CASP-3、CASP-8的表达以及降低BCL-2、NLRP3、GSDMD、CASP-1、RIPK1和RIPK3的表达来调节PANoptosis（P<0.05 或 P<0.01）。在体外实验中，TFLS抑制了TGF-β1诱导的HSC-T6细胞激活和PANoptosis（P<0.05 或 P<0.01）。

结论

TFLS可能通过靶向ZBP1来抑制PANoptosis，从而缓解肝纤维化，体现了其对细胞凋亡、焦亡（pyroptosis）和坏死性凋亡（necroptosis）的多模式调节作用。