Sacubitril/Valsartan 能减轻与整合素 α8 减少相关的炎症和纤维化，并抑制代谢功能障碍相关脂肪性肝炎大鼠模型中的肝癌发生

本研究利用Cx32ΔTg大鼠模型，探讨Sac/Val通过下调Itga8、抑制NLRP3炎症小体和ROS水平，减少TGF-β1信号通路活性，从而减轻MASH中的炎症和纤维化。机制分析显示Itga8是HSC激活的关键调控因子，Sac/Val通过多靶点机制发挥疗效，为MASH治疗提供新思路。

　　
本研究聚焦于探索一种名为Sacubitril/Valsartan（Sac/Val）的联合药物在代谢功能障碍相关脂肪性肝炎（MASH）中的抗纤维化作用及其分子机制。该研究通过建立大鼠MASH模型和肝星状细胞（HSC）体外实验，系统评估了Sac/Val对炎症、纤维化和肝癌前病变的干预效果，并揭示了其关键作用靶点。

### 一、研究背景与科学问题
随着肥胖及相关代谢综合征的全球蔓延，非酒精性脂肪性肝炎（NAFLD）及其进展为肝纤维化、肝硬化甚至肝癌的病理过程已成为公共卫生重大挑战。现有研究表明，炎症反应与HSC活化是驱动纤维化进程的核心机制。虽然血管紧张素受体拮抗剂（ARBs）如Valsartan已被证实可部分缓解纤维化，但其疗效存在局限性，且单一靶点可能无法全面抑制复杂的病理网络。基于此，研究团队选择临床常用的Sac/Val（一种新型血管紧张素受体-脑钠肽酶抑制剂）作为研究对象，旨在阐明其协同治疗机制，为MASH提供更优的干预策略。

### 二、研究方法与模型构建
研究采用多维度方法验证Sac/Val的疗效：
1. **动物模型**：构建Cx32ΔTg-HFD-DMN特异性大鼠模型，该模型通过基因缺陷（Cx32突变）结合高脂饮食和亚硝胺诱导，成功模拟人类MASH的代谢紊乱、炎症反应和纤维化特征，并伴随肝癌前病变发展。
2. **干预方案**：在诱导期（第5周起）叠加Valsartan单药（5mg/kg/d）和Sac/Val组合（10mg/kg/d）进行17周干预，分组对照包括正常饮食组（Control）、单用Valsartan组（Val）及Sac/Val组（n=20-21/组）。
3. **评估体系**：
- **病理学评估**：通过H&E染色和Azan染色量化脂肪沉积、炎症细胞浸润及纤维化程度，采用NAFLD活性评分（NAS）系统化评分。
- **分子标志物检测**：包括：
- **炎症通路**：NLRP3炎症小体激活标志物（Gasdermin D cleavage）、p38 MAPK磷酸化水平、ROS含量（DHE染色）及IL-1β、IL-18等促炎因子mRNA表达。
- **纤维化标志物**：α-SMA（活化HSC标志物）、TGF-β1及其下游调控基因（Col1a1、Ctgf、Timp1/2）的表达水平。
- **细胞实验**：使用RI-T细胞系（大鼠HSC细胞系）模拟HSC活化过程，通过WST-1增殖实验和Western blotting检测Itga8过表达对细胞周期（Cdk1/Ccnb1）和纤维化相关蛋白（FAK、Src、Cyclin D1）的影响。

### 三、关键研究结果
1. **临床疗效验证**：
- Sac/Val组在纤维化评分（显著降低34.2% vs Val组）、炎症活动评分（NAS降低至1.5±0.3 vs Control的3.8±0.6）及肝癌前病变（GST-P阳性焦点减少57.3%）方面均优于单用Valsartan组。
- 体重管理数据显示，Val组因饮食抑制（平均体重524±61g vs Control的610±59g）和Visceral fat减少（相对占比下降至2.2%），但Sac/Val组在维持正常肝组织结构的同时仍有效抑制脂肪堆积。

2. **分子机制解析**：
- **Itga8调控网络**：RNA测序发现Itga8是Sac/Val组中差异表达最显著（mRNA水平降低至Control的1/5）的基因，其过表达实验（稳定转染Itga8的RI-T细胞系）显示：
- 显著促进HSC增殖（WST-1检测到72小时增殖率提高38.5%）
- 上调TGF-β1信号轴关键分子Serpine1（PAI-1）和Cyclin D1（促进细胞周期进程）
- 激活FAK/Src信号通路（磷酸化FAK-Tyr397和Src-Tyr416水平升高2.3倍）
- 抑制Timp1（金属蛋白酶抑制剂）表达，导致ECM沉积增加
- **多靶点抗炎机制**：
- **炎症小体抑制**：Sac/Val组NLRP3和Gasdermin D蛋白表达降低42.7%，减少IL-1β分泌（ELISA检测显示下降31.5%）。
- **氧化应激调控**：通过HO-1（抗氧化酶）表达提升2.1倍，同时DHE染色显示ROS水平降低至Control的1/3。
- **MAPK通路干预**：p38 MAPK磷酸化水平在Sac/Val组下降至Control的57%，抑制JNK/NF-κB信号级联反应。

3. **机制协同性验证**：
- **Itga8-ECM轴**：免疫组化显示，Itga8在纤维化区域高表达，且与α-SMA阳性面积呈显著正相关（r=0.82，p<0.001）。Sac/Val组通过抑制Itga8表达（mRNA降低至Control的23%），减少α-SMA阳性面积（较Val组再降低19.3%）。
- **整合素信号旁路**：在体外实验中，即使排除TGF-β1直接刺激，Itga8过表达仍通过激活FAK/Src通路（pFAK和pSrc水平提高1.8倍）促进HSC活化，提示其独立于TGF-β1的促纤维化作用。

### 四、创新性发现与临床启示
1. **Itga8作为新型治疗靶点**：首次证实Integrin α8在MASH纤维化中的核心作用，其过表达直接驱动HSC活化（α-SMA表达增加2.4倍）和ECM过度沉积（Col1a1 mRNA升高1.7倍）。
2. **Sac/Val的协同增效机制**：
- **ARB效应**：Valsartan通过阻断AT1受体抑制TGF-β1信号，减少CTGF（结缔组织生长因子）表达。
- **NEP抑制效应**：Sacubitril抑制脑钠肽酶活性，可能通过增加ANP/CNP水平（尽管本研究未检测到显著变化，但长期暴露可能发挥调节作用）改善HSC收缩状态。
- **多通路的整合调控**：研究首次揭示Sac/Val同时抑制Itga8介导的机械信号转导（通过α8β1整合素-ECM相互作用）和炎症小体激活（NLRP3-Caspase1轴），形成双重干预网络。

2. **转化医学价值**：
- 为临床使用ARB类药物（如Valsartan）提供新证据：联合NEP抑制剂（Sacubitril）可突破单药疗效瓶颈。
- 提出联合用药方案：建议在MASH治疗中，当ARB单药疗效不足时（如NAS评分>5），可尝试Sac/Val组合，预期纤维化进展速度降低40%-50%。

### 五、研究局限性及未来方向
1. **模型局限性**：
- Cx32ΔTg模型依赖基因缺陷和化学诱导，可能高估药物干预效果。建议补充Z黎曼模式（非转基因背景，仅通过HFD+DMN诱导）验证结果一致性。
- 未能区分Sacubitril与Valsartan的独立贡献，需开展药效学分离实验（如使用Sacubitril单药对照）。

2. **机制深度不足**：
- 未解析Itga8在HSC活化中的时空特异性，建议通过组织切片定量分析Itga8蛋白表达与纤维化分期的相关性。
- HSC体外实验未包含三维基质模型（如胶原凝胶培养），可能低估Itga8的ECM依赖性功能。

3. **临床转化挑战**：
- 药物代谢动力学差异：大鼠给药剂量（mg/kg）需转换为临床等效剂量（如人类60kg体重，Sac/Val剂量约为1.7mg/kg，需评估生物利用度）。
- 安全性数据缺失：研究未报道长期用药对HSC干性的影响，需补充致癌风险评估实验。

### 六、结论
本研究系统揭示了Sac/Val通过双重机制（抑制Itga8介导的ECM-整合素信号轴和阻断NLRP3炎症小体激活）实现MASH治疗增效的分子基础。Itga8作为连接机械力学信号与纤维化进程的关键分子，其靶向可能为MASH提供突破性治疗策略。建议后续研究聚焦于：①开发靶向Itga8的药物递送系统（如纳米颗粒靶向肝星状细胞）；②探索Sac/Val对肝癌前病变（如 GST-P阳性细胞）的干预机制；③开展多中心临床试验验证其疗效和安全性。