《Life Sciences》：Interleukin-35 alleviates pulmonary arterial hypertension by suppressing the VEGFA/VEGFR2 signaling pathway
编辑推荐：
IL-35通过抑制炎症、凋亡和血管重塑改善肺动脉高压疗效机制研究。
Jie Feng|Kai Li|Leilei Han|Yunmam Liu|Yanqing Wu
江西省南昌医学院第二附属医院心血管科，南昌，330006，中国
摘要
肺动脉高压（PAH）是一种严重的循环系统疾病，其特征是肺动脉压力（PAP）升高，而肺毛细血管楔压（PCWP）正常，这种病理变化由肺小动脉的重构驱动。如果不进行治疗，它可能导致严重的健康并发症甚至死亡。目前的治疗方法，如内皮素受体拮抗剂、磷酸二酯酶-5抑制剂、前列腺素类似物和可溶性鸟苷酸环化酶刺激剂，可以缓解症状、改善运动能力并延缓疾病进展，但并不能针对根本的血管病变。由于这些疗法无法改善长期预后，因此给患者、家庭和社会带来了沉重的负担。因此，迫切需要开发出更有效的治疗药物来治疗PAH。
白细胞介素-35（IL-35）主要由调节性T细胞产生，是一种具有显著抗炎和免疫调节作用的分子。最近的研究表明，IL-35作为治疗PAH的新药物具有潜力。然而，IL-35如何影响肺动脉高压的具体机制仍需通过进一步实验来阐明。为此，我们建立了动物和细胞模型，并使用Western blotting、PAP测量、流式细胞术、EdU染色、划痕实验、血液生化检测、免疫荧光、酶联免疫吸附测定（ELISA）、苏木精-伊红（H&E）染色和Masson三色染色等方法分析了分子、功能和结构变化。
我们的研究结果表明，IL-35可以减轻PAH引起的炎症、细胞凋亡和平滑肌细胞增殖，降低PAP，并恢复血管重构，从而减轻PAH引起的结构和功能损伤。
引言
肺动脉高压（PAH）是一种进行性的血管疾病，其特征是小肺动脉的结构重构，导致肺血管阻力增加和平均肺动脉压力（mPAP≥20 mmHg，肺动脉楔压≤15 mmHg）[1],[2],[3],[4]。由于右心室对低压力循环的生理适应，肺动脉压力和血管阻力的升高会显著增加右心室的后负荷。一旦这些血流动力学变化超出右心室的代偿能力，就会依次引发右心室心肌重构和舒张功能障碍[5]。这些血流动力学异常会逐渐损害右心室的收缩功能，最终导致右心室衰竭、严重并发症和过早死亡，如果不进行治疗的话。
尽管PAH相对罕见，但其临床影响非常严重，全球在诊断和治疗方面存在显著差异[6]。在美国，PAH的患病率约为每百万人中有15-50例[7]。此外，在高风险人群中，如系统性硬化症或类风湿性关节炎患者中，这一数字可能上升到每百万人中有200-500例[8]。PAH的死亡率非常高，尤其是在未经治疗的情况下。尽管治疗方法有所进展（如内皮素受体拮抗剂、磷酸二酯酶-5抑制剂），现有的干预措施只能缓解症状，无法逆转已经发生的血管重构，因此仍存在重要的未满足需求[9,10]。
炎症和免疫失调是PAH发病机制的核心，这使得抗炎细胞因子成为有前景的治疗候选物[11,12]。白细胞介素-35（IL-35）是白细胞介素-12家族的成员，主要由调节性T细胞分泌，具有强大的免疫调节作用，先前的研究表明它可能通过抑制内皮细胞增殖来缓解PAH[13,14]。然而，一些关键问题尚未得到解答：IL-35是否会影响其他PAH的核心病理过程——特别是炎症、细胞凋亡和血管重构？这些效应背后的机制是什么？在本研究中，我们探讨了IL-35在PAH中的作用，重点关注其对炎症信号传导、细胞凋亡平衡和血管重构的影响，特别是VEGFA/VEGFR2通路——这一通路是血管重构的关键驱动因素。这项工作旨在填补我们对IL-35在PAH治疗潜力理解上的空白。
材料
材料
我们从南京Corues动物公司购买了36只6-8周大的野生型（WT）SD雄性大鼠（体重200±20克）。人肺动脉平滑肌细胞（PASMCs，编号HTX2164）购自中国广州的OTWO Biotech公司。人PASMCs的完整培养基（编号CM-H243）购自武汉Procell生物技术有限公司。重组人IL-35蛋白购自abbkine（武汉）生物技术有限公司。一抗α-SMA（目录号67735–1-Ig）等试剂也由该公司提供。
PAH模型中的IL-35表达
通过免疫荧光共定位分析，我们在对照组和PAH模型中检测到了IL-12A（IL-35亚单位，红色荧光）和α-SMA（绿色荧光）的表达。如图1D所示，DAPI（蓝色荧光）标记了细胞核。合并图像显示，在正常氧合和缺氧条件下的人PASMCs细胞质中都有明显的黄色重叠信号，表明PASMCs是IL-35表达的特异性靶细胞。此外，IL-12A的荧光强度...
讨论
我们的研究表明，IL-35在PAH中具有多重保护作用，在体内和体外模型中均表现出强烈的抗炎、抗凋亡和抗血管重构效果。鉴于当前的临床现状，这一点尤为重要，因为肺动脉高压的治疗主要集中在缓解症状上——具体是通过暂时性肺血管扩张来降低平均肺动脉压力[23]。
PAH的发病机制类似于一种破坏性...
局限性
尽管我们的研究证实了IL-35在减轻PAH损伤方面的有效性，包括抑制炎症、减少细胞凋亡和减弱血管重构，但仍存在一些局限性。首先，虽然我们提出了一些可能的机制，但尚未完全探索IL-35参与的STAT1/STAT4信号通路，这将在未来的研究中进一步探讨。其次...
结论
我们的研究发现，IL-35在体内和体外PAH模型中均表现出显著的改善效果。其保护机制可能通过VEGFA/VEGFR2通路发挥作用，抑制异常的炎症反应，减轻细胞凋亡，并缓解病理性的肺血管重构。这些发现表明IL-35是一种新的PAH治疗策略，为将其转化为临床干预措施提供了希望。
作者贡献声明
Jie Feng：撰写初稿，项目管理。Kai Li：方法学设计，实验实施。Leilei Han：软件操作。Yunmam Liu：数据可视化。Yanqing Wu：撰写、审稿与编辑，概念构思。
伦理批准和参与同意
动物实验得到了南昌Royo生物技术有限公司动物护理与利用委员会（RYE2025070601）的授权。资助
本工作得到了江西省卫生健康委员会科技创新重点项目（编号2024ZD007）和江西省分子医学重点实验室（编号2024SSY06231）的支持。
利益冲突声明
作者声明没有已知的财务利益或个人关系可能影响本文所述的研究。
