《Regulatory Toxicology and Pharmacology》：Subchronic Oral Toxicity and Genotoxicity of
Aurantii Fructus Immaturus Water Extract
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AFI水提取物经急性、亚急性及遗传毒性测试，未发现治疗相关不良反应，其NOAEL为5000 mg/kg bw/day，证实其安全性。
安素英（So-Young An）、宋思焕（Si-Whan Song）、许贤淑（Hyun-Suk Heo）、朴昌沃克（Chang-Wok Park）、金民秀（Min-Sub Kim）、李woo-joo（Woo-Joo Lee）、朴宇珍（Yoo-Jin Park）、申在浩（Jae-Ho Shin）、韩秉硕（Beom Seok Han）、赵万燮（Wan-Seob Cho）
韩国釜山东ア大学研究生院健康科学系，地址：Nakdong-daero 37号，550beon-gil，49315
摘要
未成熟柑橘果实（Aurantii Fructus Immaturus，简称AFI）的水提取物在传统医学中有所应用，但其毒性数据尚缺乏。本研究作为韩国国家毒理学计划（KNTP）的一部分，评估了AFI水提取物的整体毒性和遗传毒性。AFI水提取物中含有的标志化合物柚皮苷（naringin）和新橙皮苷（neohesperidin）的含量分别为7.63%和4.51%，高于AFI粉末中的含量（分别为约4%和3%）。在对大鼠进行的急性口服毒性实验中，当剂量为2500-10000 mg/kg时，AFI水提取物的半数致死剂量（LD50）超过10000 mg/kg。在剂量高达5000 mg/kg/天的亚急性口服毒性试验以及持续13周的亚慢性毒性试验中均未观察到与处理相关的不良反应。因此，AFI水提取物在大鼠体内的无观察到的不良反应水平（NOAEL）为5000 mg/kg体重/天。此外，三种基因毒性检测方法（细菌反向突变试验、体外染色体畸变试验和体内微核试验）均证实AFI水提取物不具有基因毒性。这些结果将为AFI水提取物的人体消费风险评估提供毒性数据。
引言
未成熟柑橘果实（Aurantii Fructus Immaturus，简称AFI）来源于柑橘属（Citrus aurantium）和辛柑（Citrus sinensis）的未成熟果实，是一种常用的传统草药，具有促进胃肠蠕动、增强消化功能以及潜在调节心血管功能的功效。AFI含有多种生物活性成分，如黄酮类、生物碱、香豆素和挥发油，这些成分被认为是其药理作用的基础。草药制剂的治疗效果很大程度上取决于其化学组成，而这种组成可能因采收时间、地理来源和提取方法的不同而有所差异。用于AFI质量控制的主要标志化合物是柚皮苷和新橙皮苷。动物实验已证实AFI具有多种药理作用：例如，小鼠每天口服AFI水提取物3 g/kg连续7天可显著增强胃肠蠕动；同样，每天口服0.9 mg/kg的AFI黄酮提取物7天可增加小肠蠕动并延长血液凝固时间；短期口服柚皮苷（每天25 mg/kg，持续3天）对小鼠具有保护肝脏免受毒性的作用。
在推荐剂量范围内服用AFI可产生多种有益效果，但过量摄入可能导致腹泻和头痛等不良反应。在一项大鼠急性口服毒性实验中，柚皮苷的半数致死剂量（LD50）超过16 g/kg。此外，为期六个月的重复口服毒性实验确定柚皮苷的无观察到的不良反应水平（NOAEL）为1250 mg/kg/天。一项为期28天的多草药制剂（含AFI水提取物，每天8.1 g/kg）重复剂量实验显示大鼠的运动能力下降并出现肝功能障碍迹象。最近的研究还表明，AFI粉末在大鼠体内的半数致死剂量（LD50）大于4000 mg/kg，亚慢性NOAEL为2000 mg/kg/天。
AFI传统上以粉末、水提取物和乙醇提取物的形式用于医疗用途。需要注意的是，提取过程能浓缩活性成分，这可能增强其通便效果和其他生理活性，因此使用时应谨慎。尽管AFI应用广泛，但关于其不同制剂形式的全面毒理学数据仍然有限。此前，我们的团队已发布了AFI粉末的毒性参考值。然而，无论是水提取物还是乙醇提取物的毒理学特性尚未完全阐明。因此，本研究旨在评估AFI水提取物的整体毒性和遗传毒性，以用于监管风险评估。所有毒性研究均遵循韩国食品药品安全厅（MFDS）发布的“药品毒性研究标准”进行，并符合经济合作与发展组织（OECD）及MFDS制定的良好实验室规范（GLP）要求。
AFI的选取与水提取物的制备
本研究使用的AFI来自中国，由Wansan Pharmaceutical（韩国全罗北道）提供干制品形式，并经过两位专家验证：韩国生物科学技术研究院的李亨圭博士（Daejeon）和中南国立大学的裴基焕教授（Daejeon）。将79.0公斤的干燥未成熟柑橘皮放入提取器中，并加入相当于其重量十倍的纯净水进行提取。提取过程进行了两次。
AFI水提取物的化学性质
冻干后的AFI水提取物呈棕色，使用无菌水或MEM培养基作为溶剂制备剂量制剂。表1显示了AFI水提取物在4°C和23°C下储存18个月后的标志化合物含量及其稳定性。结果显示，柚皮苷和新橙皮苷的含量分别为7.63%和4.51%，且在γ射线照射及多种条件下仍保持稳定。讨论与结论
AFI在传统草药中广泛应用，因其具有多种功效，如“散除体内滞留的能量”和“消除痰液”。中国药典建议每日服用AFI 3–9克，可采取水提取物、乙醇提取物或粉末三种形式。AFI的化学组成因制备方法不同而有所差异，通常提取物中的活性成分浓度更高。
作者贡献声明
李woo-joo（Woo-Joo Lee）： 数据分析、概念构建。朴宇珍（Yoo-Jin Park）： 数据分析、概念构建。朴昌沃克（Chang-Wok Park）： 数据分析、概念构建。金民秀（Min-Sub Kim）： 数据分析、概念构建。申在浩（Jae-Ho Shin）： 文稿撰写、审稿与编辑、资源协调、项目管理、资金筹措、概念构建。韩秉硕（Beom Seok Han）： 文稿撰写、审稿与编辑、资源协调、项目管理、资金筹措、概念构建。赵万燮（Wan-Seob Cho）： 文稿撰写、审稿与编辑、资源协调、项目管理利益冲突
作者声明无利益冲突。数据获取
数据可应要求提供。资金来源
本研究得到了韩国食品药品安全厅（MFDS）的资助（项目编号：22212MFDS235和23211MFDS201）。利益冲突声明
作者声明没有可能影响本研究结果的已知财务利益或个人关系。致谢
本研究得到了韩国食品药品安全厅（MFDS）的资助（项目编号：22212MFDS235和23211MFDS201）。
