从中国稻田鳝(Monopterus albus)肠道中分离出的Plesiomonas shigelloides菌株NBPZ-032的完整基因组序列

《Microbiology Resource Announcements》:Complete genome sequence of Plesiomonas shigelloides strain NBPZ-032, isolated from the intestine of Chinese rice-field eels (Monopterus albus)

【字体: 时间:2025年12月11日 来源:Microbiology Resource Announcements 0.6

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  中国水稻田水蛭肠道分离菌株NBPZ-032的基因组测序完成,包含3.7Mbp的两个环状复制子,3127个蛋白编码基因,系统发育分析显示与Plesiomonas shigelloides NCTC 10360高度相关。

  

摘要

我们公布了从中国稻田鳝(Monopterus albus)肠道中分离出的Plesiomonas shigelloides菌株NBPZ-032的完整基因组,其总长度为3,711,769 bp,包含3,127个蛋白质编码序列。

公告

中国稻田鳝(Monopterus albus)具有重要的经济价值,是中国地区食品文化的重要组成部分,年产量超过30万吨,其中近一半来自湖北省(1)。Plesiomonas shigelloides是一种革兰氏阴性、不形成孢子、杆状、兼性厌氧细菌,也是水生动物病原体(2),但其对该物种的致病性目前了解甚少(3)。
菌株NBPZ-032于2025年4月从中国湖北省仙桃市(113.4430°N, 30.3278°E)人工养殖的稻田鳝肠道中分离得到。整个肠道被无菌切除,称重10克后置于10毫升无菌磷酸盐缓冲盐水(PBS)中匀浆,随后用PBS进行系列稀释并涂布在溶原菌肉汤(LB)琼脂上。在30°C下孵育2天后(HP150S,瑞华,中国),通过三轮划线法在LB平板上纯化出单个菌落,然后在30°C下用LB培养至对数中期(使用TU-1810分光光度计,PERSEE,中国)。基因组DNA的提取遵循QiAGEN公司的Blood & Cell Culture DNA Mini Kit(Cat#13323)说明书进行,纯度和定量通过NanoDrop One UV-Vis分光光度计(Thermo Fisher Scientific,美国)和Qubit 3.0荧光计(Invitrogen,美国)完成。长读长测序和短读长测序均使用同一份DNA样本进行。长读长测序采用PippinHT系统(Sage Science,美国)对大于10 kb的DNA片段进行选择。DNA文库的制备使用了Ligation Sequencing Kit V14(Cat#SQK-LSK-114;Oxford Nanopore Technologies Ltd. [ONT],英国牛津),无需DNA剪切,并使用Nanopore PromethION测序仪(ONT)在R10.4.1流动池上进行测序。原始序列的碱基校正、条形码分割和接头序列去除采用Guppy v.5.0.16软件(4)完成。原始数据(97,502条读长,总计1,144,952,152 bp)的平均读长为11,742.86 bp,N50值为24,867 bp;经过碱基校正和接头去除后得到97,497条读长(总计1,144,951,241 bp)。对于短读长测序,使用Covaris LE220超声仪(美国)将基因组DNA随机片段化,再用MGIEasy DNA Clean Beads(Cat#1000005279,MGI Tech Co., Ltd.,中国)将其筛选至2000-4000 bp大小。DNA文库的制备遵循MGIEasy FS PCR Free DNA library preparation set(Cat#1000013455,MGI)流程。测序在DNBSEQ-T7RS平台上进行,采用150个核苷酸长度的配对末端读长。原始数据(7,247,348条读长,总计1,087,102,200 bp)通过fastp v.0.23.1程序(5)进行预处理,去除接头和低质量数据,最终得到6,975,838条有效读长(总计1,045,312,346 bp)。
利用Unicycler v.0.5.0软件(6)将完整基因组(总计3,711,769 bp)组装成两个环状复制子:一个3,359,540 bp的环状染色体(GC含量52.01%,深度296.61×)和一个352,229 bp的环状质粒(GC含量49.75%,深度280.43×)。通过Type (Strain) Genome Server进行的系统发育分析显示,该菌株与P. shigelloides标准菌株NCTC 10360(NCBI组装编号GCA_900087055)具有密切的进化关系,这一结论得到了GGDC公式2计算得出的75.6%的DNA-DNA杂交值的支持(7)。通过NCBI PGAP v.6.10(8)进行注释,鉴定出3,127个蛋白质编码序列、120个tRNA基因和40个rRNA基因。除非另有说明,本研究均采用默认参数。

致谢

本研究得到了中国湖北省重点研发计划(项目编号2023BBB176)、湖北省自然科学基金青年项目(项目编号2024AFB372)、湖北省中央引导地方科技发展专项基金(项目编号2023EGA007)以及湖北省农业科技创新中心创新团队项目(项目编号2025-620-000-001-023)的资助。
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