κ-阿片受体激动剂和神经激肽-3受体拮抗剂对雄性大鼠睾酮分泌的抑制作用

《Theriogenology》：Inhibitory effects of a κ-opioid receptor agonist and neurokinin-3 receptor antagonist on testosterone secretion in male rats

口服nalfurafine（KOR激动剂）和fezolinetant（NK3R拮抗剂）单独或联合给药可抑制雄性大鼠睾酮分泌，协同效应显著增强抑制效果，为开发新型哺乳动物口服避孕剂提供依据。

　　
本研究聚焦于开发新型口服避孕剂在雄性哺乳动物中的应用潜力。实验以成年 intact 雄性 Wistar-Imamichi 大鼠为研究对象，通过口服给予选择性κ-阿片受体（KOR）激动剂纳夫鲁法尼（nalfurafine）和神经激肽3受体（NK3R）拮抗剂费佐林坦（fezolinetant）及其联合用药，系统评估了这两种药物对睾酮分泌的抑制作用及其协同效应。

在实验设计方面，研究团队构建了多组对照实验体系。首先通过静脉注射单剂量纳夫鲁法尼（0.01 mg/kg BW）证实其能显著降低睾酮水平（在给药后1.25-3小时达到统计学显著差异，P<0.05），这为后续口服给药研究提供了剂量参考依据。随后设计了口服给药实验组，纳夫鲁法尼的剂量梯度覆盖0.001-0.5 mg/kg BW，费佐林坦的剂量范围设定为0.3-10 mg/kg BW。特别值得注意的是，联合用药组采用"纳夫鲁法尼0.01+费佐林坦1"、"纳夫鲁法尼0.01+费佐林坦3"、"纳夫鲁法尼0.1+费佐林坦3"三种组合剂量，这种剂量配比设计既考虑了单药的有效剂量范围，又通过组合探索协同效应。

实验结果揭示了三个关键发现：其一，纳夫鲁法尼在0.1 mg/kg BW和0.5 mg/kg BW剂量下，口服给药后5-10小时可显著抑制睾酮分泌（P<0.01），而更低剂量（0.001-0.01 mg/kg BW）则未显示统计学差异。其二，费佐林坦在10 mg/kg BW剂量时，口服给药后2-8小时可降低睾酮水平（P<0.05），但3 mg/kg BW剂量未达显著阈值。其三，联合用药组表现出显著的协同效应，其中"纳夫鲁法尼0.01+费佐林坦3"组合在2-6小时时段的协同指数（CI）为0.66，表明该组合对睾酮抑制效果达到1.5倍单药最佳效果。

机制研究方面，团队通过多维度分析揭示了药物作用的潜在通路。首先证实KNDy神经元作为下丘脑-垂体-性腺轴的核心调控单元，其活动受神经激肽B（NKB）和 dynorphin A（Dyn）的双重调节。纳夫鲁法尼作为KOR激动剂，通过激活 dynorphin-A/KOR信号通路抑制KNDy神经元放电频率，而费佐林坦作为NK3R拮抗剂则阻断NKB/KN3R信号传导。值得注意的是，联合用药组在特定时间点的协同效应可能源于对KNDy神经元中不同受体亚型的双重调控——纳夫鲁法尼主要作用于表达KOR的神经元亚群，费佐林坦则针对表达NK3R的亚群，这种双靶点协同机制使整体抑制效果显著增强。

剂量效应分析显示，纳夫鲁法尼的有效抑制剂量下限为0.1 mg/kg BW，与临床治疗瘙痒症的剂量（0.01-0.1 mg/kg BW）基本一致，但需注意0.5 mg/kg BW已超出安全范围上限（NOAEL为0.04-0.5 mg/kg BW）。费佐林坦的口服有效剂量为10 mg/kg BW，与人类临床试验剂量（45 mg/天）换算后对应0.3 mg/kg BW，表明该药物在啮齿类动物中的效力可能低于人类。这种剂量差异可能与物种间NK3R受体亚型分布及信号转导效率不同有关。

实验创新性体现在：（1）首次在啮齿类动物中验证KOR激动剂与NK3R拮抗剂的协同效应；（2）建立口服给药的可靠模型，突破传统注射式避孕剂的应用限制；（3）通过时序性分析发现，联合用药组在2-6小时（P<0.001）和2-8小时（P<0.01）均呈现显著协同作用，而单药组仅在特定时间窗有效。

讨论部分指出生理抑制机制可能涉及三个层面：①直接抑制KNDy神经元放电；②通过调节下丘脑-垂体轴改变促性腺激素释放激素（GnRH）脉冲频率；③影响性腺对激素的敏感性。研究特别强调，联合用药可能通过双重阻断KNDy神经元的活动调节机制，实现更精准的睾酮抑制。例如，纳夫鲁法尼激活KOR受体可增强 dynorphin-A 的抑制效应，而费佐林坦阻断NK3R则解除NKB的正向调节作用，这种双重干预机制可能比单一靶点更具优势。

临床转化潜力方面，研究证实纳夫鲁法尼和费佐林坦的口服生物利用度良好，给药后12小时内即可达到有效抑制浓度峰值。值得注意的是，联合用药组的AUC值（0-12小时）较单药组降低幅度达30%-50%，提示存在显著的叠加效应。这种协同作用在动物模型中已得到初步验证，为后续开发广谱性口服避孕剂提供了理论依据。

研究局限性主要体现为：（1）样本量较小（N=5-6），可能影响结果的稳定性；（2）未进行长期给药实验，无法确定抑制效果的持续性；（3）未深入探讨药物对生殖系统其他环节（如精原细胞成熟、性激素受体表达）的影响。建议后续研究应扩大样本量，开展多周期给药实验，并结合分子生物学手段（如qPCR检测KNDy神经元中KOR和NK3R的表达量）深入解析作用机制。

该研究在动物避孕领域具有重要价值，其开发的口服联合用药方案可能为动物园、野生动物保护机构及伴侣动物繁殖管理提供新工具。特别值得关注的是，联合用药组在10 mg/kg BW的费佐林坦剂量下未出现毒性反应（NOAEL达30 mg/kg BW），这为开发低毒、高效的新型避孕药物提供了可行路径。未来研究可进一步探索给药频率优化、药物代谢动力学特征及对动物行为的影响，推动该技术的实际应用。