靶向RUNX1移码突变的新型T细胞受体治疗急性髓系白血病

《Leukemia》：A T-cell receptor targeting RUNX1 frameshift mutations in acute myeloid leukemia

本期推荐一项针对急性髓系白血病（AML）的创新免疫治疗研究。为攻克RUNX1突变AML预后差、缺乏靶向治疗的难题，研究人员开展了靶向RUNX1移码突变产生的新抗原研究。通过免疫肽组学技术筛选出13个新抗原肽，利用pMHC四聚体从健康人源中分离出特异性T细胞克隆，成功鉴定出可识别内源性RUNX1突变的T细胞受体（TCR）。该TCR工程化T细胞在体外和小鼠模型中均展示出对白血病干细胞的特异性杀伤能力，为TCR-T细胞治疗RUNX1突变AML提供了新策略。

　　

在急性髓系白血病（AML）的治疗迷宫中，RUNX1基因突变如同一道难以逾越的屏障——这类发生在10%-15%成人AML患者中的突变，不仅与恶劣预后紧密关联，更棘手的是，其中三分之一会通过移码突变产生具有致癌性的C端延长蛋白。传统的化疗和靶向治疗对这类患者效果有限，而免疫治疗又因缺乏理想靶点而步履维艰。正是在这样的背景下，一项发表于《Leukemia》的研究带来了突破性进展：科学家们成功找到了一把能够精准识别RUNX1突变肿瘤细胞的"智能钥匙"——特异性T细胞受体（TCR）。

这项研究源于一个大胆的设想：能否利用RUNX1移码突变产生的独特新抗原（neoantigen）作为免疫治疗的靶点？与正常细胞完全不同的这些新抗原，犹如给癌细胞贴上了专属"条形码"，为精准免疫治疗提供了理想靶标。研究团队首先通过生物信息学预测发现，RUNX1移码突变产生的长替代阅读框（ARF）中潜藏着大量能与常见HLA-I类分子结合的肽段，其中与HLA-B*07:02强结合的预测肽段就达47个之多。

为了验证这些新抗原的真实呈递情况，研究人员采用了免疫肽组学（immunopeptidomics）这一尖端技术。他们在5个表达不同HLA-I类分子的EB病毒转化B细胞（EBV-B）中导入RUNX1移码突变基因，通过质谱分析成功捕获到13个确凿无疑的新抗原肽。这些肽段如同隐藏在癌细胞表面的"分子指纹"，为后续T细胞识别奠定了坚实基础。

关键技术方法包括：利用免疫肽组学技术鉴定细胞表面呈递的新抗原肽；使用肽-MHC（pMHC）四聚体从42名健康捐赠者外周血单核细胞（PBMC）中筛选特异性CD8⁺T细胞；通过CRISPR/Cas9基因编辑技术在AML细胞系中引入RUNX1移码突变；采用T细胞受体（TCR）基因转导技术构建工程化T细胞；建立免疫缺陷小鼠（hIL-7xhIL-5 KI NSG）模型评估体内抗肿瘤效果。患者样本来源于莱顿大学医学中心生物样本库，经伦理委员会批准（B16.039）。

新抗原鉴定与T细胞分离

研究人员针对9个新抗原肽合成了14种pMHC四聚体，从健康捐赠者中成功分离出9个具有强反应性的T细胞克隆。这些克隆能特异性识别6种RUNX1新抗原，其中包括HLA-B*07:02限制性的APGGGRVEALL（RUNX1-APG）和GPRAPDGQDL（RUNX1-GPR）。值得注意的是，表达内源性RUNX1移码突变的AML细胞系SIG-M5 C9能被针对这两个新抗原的T细胞克隆特异性识别，证实了这些新抗原在真实白血病环境中的自然呈递。

TCR工程化T细胞的抗白血病活性

研究人员选取了针对RUNX1-GPR新抗原的4.2C6 TCR进行深入验证。将TCR基因转导至CD8⁺T细胞后，工程化T细胞展现出对多种RUNX1突变白血病细胞的强力杀伤作用。特别令人振奋的是，这些T细胞能够识别不同成熟阶段的AML细胞，包括具有白血病干细胞（LSC）表型（CD34⁺CD38^-CD45RA⁺）的细胞群体，这对防止白血病复发具有重要意义。

体内外功能验证

在免疫缺陷小鼠模型中，4.2C6 TCR-T细胞注射后显著延缓了RUNX1突变白血病细胞的生长速度。更重要的是，在患者来源的AML样本测试中，该TCR-T细胞能有效杀伤携带RUNX1移码突变的原代白血病细胞，而对RUNX1野生型样本则无反应，展现出良好的特异性。

讨论与意义

本研究首次证实RUNX1移码突变产生的长替代阅读框（ARF）可作为AML免疫治疗的理想靶标。与传统肿瘤相关抗原不同，新抗原由于完全不存在于正常组织，避免了on-target off-tumor毒性的风险。虽然目前鉴定的HLA-B*07:02限制性新抗原仅适用于15%的群体，但研究方法为开发针对其他HLA类型的RUNX1新抗原库奠定了基础。

值得注意的是，RUNX1突变AML通常具有原始干细胞样特征，富含化疗耐药的白血病干细胞（LSC）。本研究证明TCR-T细胞能够靶向不同成熟阶段的AML细胞，包括LSC，这对于实现长期缓解具有重要意义。然而，TCR亲和力、HLA表达水平以及肿瘤微环境等因素对临床疗效的影响仍需进一步探索。

该研究不仅为RUNX1突变AML患者提供了新的治疗选择，更开创了针对转录因子突变的新抗原靶向策略。随着TCR基因治疗技术的日益成熟，这项研究成果有望很快转化为临床实践，为这类预后不良的AML患者带来新的希望。