免疫组化评估T细胞受体β恒定区1表达在鉴别良恶性幼稚T细胞群及揭示不同TRBC1/TCR表型中的价值

《Journal of Hematopathology》：Immunohistochemical evaluation of T cell receptor and T cell receptor beta constant 1 expression distinguishes benign and neoplastic immature T-cell populations and reveals discrete TRBC1/TCR phenotypes

本研究针对T细胞克隆性评估中免疫组化(IHC)方法应用不足的问题，开展了TRBC1免疫组化在福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)组织中对幼稚T细胞群体评估的研究。通过对良性胸腺组织、胸腺瘤和T淋巴母细胞白血病/淋巴瘤(T-LL)的检测，发现T-LL病例呈现TRBC1限制性表达模式，而良性组织为多型性表达。该研究证实TRBC1 IHC可有效区分良恶性幼稚T细胞群体，为T细胞肿瘤诊断提供了新的病理学工具。

　　

在血液病理学诊断领域，区分肿瘤性T细胞增殖与非肿瘤性T细胞增生一直是个棘手难题。传统上，通过聚合酶链反应(PCR)和下一代测序(NGS)等分子生物学方法分析T细胞受体(TCR)基因重排谱是鉴定T细胞克隆性的金标准。然而，这些方法并非在所有医疗机构都能方便开展，且对样本质量要求较高。近年来，评估T细胞受体β恒定区(TRBC)表达成为一种新兴的T细胞克隆性评估策略。由于功能性TCR重排，每个表达TCRα/β的T细胞仅表达TRBC1或TRBC2同种型之一，因此多克隆T细胞群体包含TRBC1和TRBC2表达的混合细胞，而单克隆群体则表现为单一TRBC同种型的限制性表达。

虽然流式细胞术是评估TRBC表达的成熟方法，但并非适用于所有样本类型和实践环境。免疫组织化学(IHC)作为替代方法，可在福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)组织上进行TRBC表达评估，且能提供TRBC染色的空间背景信息。尽管早期研究显示TRBC IHC在区分成熟T细胞肿瘤与非肿瘤过程中具有价值，但其在幼稚T细胞群体中的应用尚未得到充分探索，特别是在T淋巴母细胞白血病/淋巴瘤(T-LL)与良性胸腺组织鉴别诊断中的价值有待阐明。

在此背景下，弗吉尼亚大学健康系统病理学与检验医学系的Sahil Chaudhary等研究人员在《Journal of Hematopathology》上发表了一项研究，旨在探讨TRBC1 IHC在幼稚T细胞增殖中的表达特征。研究团队假设TRBC1 IHC能够区分良恶性幼稚T细胞群体，并为T-LL的诊断和分类提供新的见解。

研究方法概述

本研究为回顾性研究，经机构审查委员会批准。研究人员筛选了2019-2024年期间的T-LL病例，包括非特指型T-LL和早期T前体淋巴细胞白血病/淋巴瘤(ETP-LL)，所有病例均有可用的FFPE组织。同时选取良性胸腺组织和胸腺瘤(AB、B1和B2型)作为良性幼稚T细胞群体的对照。所有病例诊断均经血液病理学家确认符合第五版世界卫生组织造血淋巴组织肿瘤分类标准。

研究采用免疫组织化学方法检测TRBC1、CD3、TCR-BF1和TCR-δ的表达。T-LL病例还进行了TdT染色。TRBC1表达采用半定量评分：T系细胞中≤15%表达为阴性限制，≥85%表达为阳性限制，16-84%表达为多型性。评分时以CD3和/或TdT阳性细胞为分母。所有染色由两名血液病理学家独立评估，存在分歧时由第三名病理学家仲裁。

研究还回顾性分析了流式细胞术数据、TCRγ基因重排和ClonoSEQ检测结果，以与IHC结果进行相关性分析。

TRBC1在良性胸腺组织和胸腺瘤中的表达特征

研究分析了6例良性胸腺组织和5例胸腺瘤。所有病例的T细胞区均以CD3阳性T系细胞为主。大多数T细胞表达TCR-BF1，仅少数表达TCR-δ。重要的是，所有良性胸腺组织和胸腺瘤病例中的T细胞均显示多型性TRBC1表达模式，符合正常T细胞群体的预期特征。

T淋巴母细胞白血病/淋巴瘤的TRBC1表达模式

研究共纳入21例患者的24例T-LL标本，包括16例骨髓、7例淋巴结和1例骨病变活检。所有T-LL病例均显示异常的TRBC1限制性表达模式：3例患者(14%)为阳性限制，18例患者(86%)为阴性限制。多名患者的多部位标本显示TRBC1染色一致性。在骨髓穿刺凝块和脱钙骨髓核心活检中，TRBC1染色质量相当。

TRBC1与TCR表型的关联分析

通过分析TRBC1、TCR-BF1和TCR-δ染色，研究人员发现了五种不同的表型特征：

1. 1.
   TRBC1阳性限制/TCR-BF1阳性/TCR-δ阴性(10%)
2. 2.
   TRBC1阳性限制/TCR-BF1阴性/TCR-δ阴性(5%)
3. 3.
   TRBC1阴性限制/TCR-BF1阳性/TCR-δ阴性(24%)
4. 4.
   TRBC1阴性限制/TCR-BF1阴性/TCR-δ阳性(29%)
5. 5.
   TRBC1阴性限制/TCR-BF1阴性/TCR-δ阴性(TCR null，33%)

值得注意的是，TCR-δ阳性病例均缺乏TRBC1表达，而近三分之一病例表现为TCR null表型。

与其他检测方法的相关性

流式细胞术分析显示，同时进行IHC和流式检测的3例病例均一致表现为表面TRBC1阴性和IHC阴性限制模式。分子检测方面，TCRγ基因重排PCR在11例可评估病例中均检测到克隆性重排(100%)。ClonoSEQ检测在4例患者中进行了分析，2例阳性，2例阴性。总体而言，TRBC1 IHC与分子克隆性评估方法在15例患者中的13例(87%)结果一致。

诊断挑战与评分策略

研究比较了以CD3和TdT为参照的TRBC1评分策略。CD3能突出幼稚群体，但也会染色背景成熟T细胞；TdT对幼稚淋巴细胞更特异，但对固定和脱钙效应更敏感。在肿瘤负荷高的病例中，TRBC1表达模式明显，定量评估非必需；但在低肿瘤负荷样本中，准确评估可能极具挑战性。

研究结论与意义

本研究证实TRBC1免疫组织化学是评估幼稚T细胞群体的可靠方法。T-LL病例呈现明显的TRBC1限制性表达模式，而良性胸腺组织和胸腺瘤则表现为多型性染色。TRBC1 IHC在区分纵隔和头颈部小样本中的良性胸腺组织与T-LL方面具有特别价值，但在低肿瘤负荷情况下诊断效用有限。

研究发现T-LL中TCR和TRBC1表达模式与成熟T细胞淋巴瘤明显不同，强调了进一步细化幼稚T细胞增殖中TCR和TRBC表达谱的必要性。特别是需要探索TRBC2阳性和TRBC null表型特征，这些发现对理解T-LL的生物学特性具有重要意义。

从临床实践角度看，包含CD3、TdT、TRBC1和角蛋白的有限IHC组合可能足以区分胸腺增生、胸腺瘤和T-LL，尤其在组织有限和缺乏流式细胞术的情况下非常实用。此外，T细胞肿瘤对TRBC同种型的选择性利用为靶向治疗提供了有前景的方向，TRBC IHC分型可能在未来患者选择TRBC靶向治疗中发挥重要作用。

总体而言，这项研究为TRBC1 IHC在幼稚T细胞肿瘤诊断中的应用提供了有力证据，拓展了这一标志物在血液病理学领域的应用范围，为T细胞肿瘤的精确诊断和分类贡献了新的见解。