mRNA-LNP疫苗编码CDV血凝素为貉子提供高效保护：突破传统疫苗局限的新策略

《npj Vaccines》：mRNA-LNP vaccine encoding CDV hemagglutinin confers effective protection in raccoon dogs

为应对犬瘟热病毒（CDV）在貉子等高致病性宿主中引发的严重疫情，研究人员开发了一种编码分泌型四聚体CDV血凝素（H）蛋白的mRNA-LNP疫苗。该疫苗在貉子中诱导高水平中和抗体，攻毒后实现100%存活率，且显著减轻组织病理损伤，为野生动物及经济动物CDV防控提供了创新解决方案。

　　

犬瘟热病毒（Canine Distemper Virus, CDV）是一种高度传染性的莫比病毒属病原体，可感染多种食肉动物，引发呼吸道、胃肠道及神经系统疾病，尤其对貉子（Nyctereutes procyonoides）等养殖皮毛动物造成近乎100%的死亡率。当前使用的减毒活疫苗（Live-attenuated Vaccine, LAV）虽能提供有效免疫，但存在毒力返祖、对免疫缺陷宿主不安全等问题；灭活疫苗和亚单位疫苗则需多次免疫且保护效果有限。此外，貉子作为CDV的重要储存宿主，其疫苗评价模型亟待完善。为此，中国农业科学院特产研究所与南京诚仕（TheraRNA）生物医药技术有限公司的合作团队在《npj Vaccines》发表研究，首次开发了基于mRNA-LNP（Lipid Nanoparticle）技术的CDV血凝素（Hemagglutinin, H）疫苗，并在貉子中系统评估其免疫原性与保护效力。

研究采用的关键技术包括：①设计编码CDV H蛋白胞外域（ECD）的mRNA序列，并通过信号肽（SP）和四聚体结构域（Tβtetra）优化抗原分泌与稳定性；②利用微流控技术制备mRNA-LNP，动态光散射（DLS）表征颗粒粒径（约108 nm）与均一性；③通过间接免疫荧光（IF）、Western Blot（WB）验证体外抗原表达；④在BALB/c小鼠和貉子模型中评价疫苗免疫原性（ELISA检测抗体、流式细胞术分析T细胞亚群）；⑤以CDV强毒株（HBF-1株）攻毒，通过生存率、临床评分、组织病理学（H&E染色）和qPCR病毒载量量化保护效果。

CDV-H mRNA-LNP疫苗的体内外表达验证

研究人员成功合成并封装了编码分泌型四聚体CDV H蛋白的mRNA，其纯度达90.2%，LNP粒径均匀（PDI=0.063）。小鼠体内荧光成像显示疫苗在注射部位高效滞留，体外转染CHO细胞后通过免疫荧光和WB检测到约95 kDa的糖基化H蛋白表达，证实疫苗具备良好的递送效率与抗原表达能力。

小鼠模型中诱导抗原特异性免疫应答

BALB/c小鼠免疫后，mRNA-H组在21天即产生高滴度H蛋白特异性抗体，且CD4⁺T细胞比例显著升高，提示疫苗偏向Th细胞介导的体液免疫应答，为后续大型动物实验奠定基础。

貉子中的安全性与免疫原性评估

疫苗在貉子中未引起局部或全身不良反应，体温、摄食及粪便均正常。免疫21天后，mRNA-H组和LAV组血清中和抗体滴度显著高于PBS对照组，同时外周血CD4⁺T细胞比例增加，再次验证疫苗以体液免疫为主导的保护机制。

攻毒后的保护效力与临床结局

攻毒实验显示，mRNA-H组貉子全部存活，且无发热、腹泻或神经系统症状，而PBS组全部死亡。与LAV组相比，mRNA-H组动物食欲维持更好，肠道病理损伤更轻，肛拭子抗原检测转阴时间更早，表明其临床保护效果优于传统减毒疫苗。

组织病理学与病毒载量分析

脑、肺、脾等组织病理评分显示，mRNA-H组仅见轻微水肿和炎症浸润，而PBS组出现神经元坏死、肺泡结构破坏及脾脏出血。qPCR检测进一步证实mRNA-H组各器官病毒RNA载量显著降低，尤其在直肠和肠系膜淋巴结中几乎无病毒残留，说明疫苗有效抑制了全身病毒扩散。

结论与展望

本研究首次证明CDV-H mRNA-LNP疫苗在貉子中可诱导强效中和抗体与CD4⁺T细胞应答，攻毒后提供完全保护且显著减轻组织病变。其优势在于避免了减毒疫苗的毒力风险，无需佐剂即可激发持久免疫，并具备快速适配流行毒株的潜力。未来需进一步评估疫苗在不同CDV基因型中的交叉保护性、长期免疫记忆及在其他易感物种（如狐狸、水貂）中的适用性。该工作为mRNA技术在兽医疫苗领域的应用提供了重要范式，对控制野生动物CDV传播及保障皮毛养殖业可持续发展具有深远意义。