基于ERP-iELISA的湖北地区猪弓形虫病流行特征及感染源鉴别研究

《Parasitology Research》：Prevalence of porcine toxoplasmosis using ERP-iELISA in Hubei Province

本研究针对猪弓形虫病感染源难以鉴别的问题，开发了基于卵囊特异性蛋白ERP的iELISA检测方法。通过对湖北省17个地区2303份猪血清样本的检测，首次获得猪群卵囊感染的大规模流行病学证据（阳性率16.63%），为制定源头防控策略提供了重要工具。

　　

弓形虫（Toxoplasma gondii）是一种能够感染几乎所有哺乳动物的专性细胞内寄生虫，给人类健康和畜牧业发展带来严重威胁。在养猪业中，弓形虫感染不仅造成经济损失，更通过猪肉产品威胁公共卫生安全。然而，传统的检测方法只能判断是否感染，却无法区分感染来源——究竟是摄入了含组织包囊的未熟肉制品，还是接触了被卵囊污染的环境？这一盲点严重制约了精准防控策略的制定。

正是在这一背景下，发表于《Parasitology Research》的研究团队开展了一项创新性研究。他们利用弓形虫孢子化卵囊阶段特异性表达的ERP蛋白，建立了能够特异性鉴别卵囊来源感染的间接酶联免疫吸附试验（iELISA）方法，并对湖北省这一养猪大省的弓形虫感染状况进行了全面调查。

研究团队采用了几项关键技术方法：首先利用大肠杆菌表达系统制备重组ERP抗原，通过Western blot验证其特异性；随后建立并优化TgERP-iELISA检测体系，确定最佳反应条件；最后对来自湖北省17个地区115个养殖场的2303份猪血清样本进行回顾性血清学调查，同时采用TgGRA1-iELISA作为对照检测方法。

Preparation of Recombinant antigen ERP and Western blot analysis

研究成功表达了重组ERP蛋白，Western blot分析显示该蛋白仅与猪抗弓形虫卵囊阳性血清发生特异性反应，而与阴性血清、包囊阳性血清及速殖子阳性血清均无交叉反应，证实ERP蛋白能够血清学区分猪弓形虫的不同感染来源。

Optimization of TgERP-iELISA

通过棋盘滴定法确定最佳反应条件：抗原包被浓度5μg/mL，猪血清稀释度1:50，酶标二抗稀释度1:1000。优化后的封闭条件为5%脱脂牛奶封闭60分钟，最佳一抗、二抗孵育时间均为30分钟，底物显色时间25分钟。以22份弓形虫阴性猪血清确定cutoff值为S/N值>3.56。

Evaluation of TgERP-iELISA

特异性试验显示TgERP-iELISA与猪常见病毒（CSFV、PCV、PRV）及弓形虫速殖子、包囊阳性血清均无交叉反应。敏感性试验表明该方法可检测1:1600稀释的卵囊阳性血清，证明建立的检测方法具有良好的特异性和灵敏度。

Investigation of Porcine T. gondii Oocyst Infection

流行病学调查结果显示，TgGRA1-iELISA检测总阳性率为32.31%（744/2303），而TgERP-iELISA检测卵囊感染阳性率为16.63%（383/2303）。所有TgERP-iELISA阳性样本同时为GRA1抗体阳性，表明湖北省猪群中同时存在包囊感染和卵囊感染两种模式。不同地区感染率存在显著差异，其中天门市（35.00%）、随州市（34.00%）和仙桃市（38.00%）卵囊感染率较高，而荆州市未检测到卵囊感染。

研究结论表明，湖北省猪群中弓形虫感染普遍存在，且感染来源具有多样性。TgERP-iELISA方法的建立实现了从"事后统计"到"事前溯源"的转变，为养猪场制定针对性防控策略提供了科学依据。特别是发现卵囊感染在某些地区占主导地位，提示环境控制（如饲料高温处理、饮水消毒）的重要性不亚于肉类食品安全管理。

该研究的创新点在于首次大规模应用卵囊特异性标志物进行猪弓形虫病感染源鉴别，填补了湖北省该领域基础数据的空白。未来研究方向包括开发更快速的现场检测工具（如胶体金试纸条），结合风险因素分析提供更具针对性的防控建议，并在"One Health"框架下开展人兽共患病的协同监测与防控。