Vitek-2 compact仪器在兽医领域用于葡萄球菌属（Staphylococcus spp.）和肠球菌属（Enterococcus spp.）抗菌敏感性检测的方法评估

《Journal of Clinical Microbiology》：Veterinary method evaluation of Vitek-2 compact for antimicrobial susceptibility testing of Staphylococcus spp. and Enterococcus spp.

本研究评估了Vitek-2 Compact AST-GP81卡与Sensititre COMPGP1F板在犬猫病原菌（包括葡萄球菌和肠球菌）的抗生素敏感性测试性能，发现总体 Essential Agreement达96%，Categorical Agreement达94%，但部分抗生素如多西环素、氯霉素存在验证失败问题，需通过诱导硝基苯甲酰脲酶测试确认β-内酰胺酶活性。建议更新测试面板以包含人类临床breakpoint范围，并优先使用万古霉素等关键抗生素的替代检测方法，以支持One Health的耐药性监测体系。

　　
本研究聚焦于评估Vitek-2 Compact自动化微生物鉴定与抗生素敏感性测试系统（AST）在犬猫病原菌中的性能表现，通过与实验室传统方法Sensititre COMPGP1F dried broth microdilution（BMD）进行对比验证。研究涵盖三种主要病原体：非金黄色葡萄球菌/卢德氏菌的葡萄球菌属（51株）、金黄色葡萄球菌及卢德氏菌（30株）和肠球菌属（34株）。通过跨物种方法验证、质量控制重复测试及辅助检测手段，系统评估了15种抗生素的敏感性测试结果，并针对不同物种的临床 breakpoints进行适配性分析。

### 关键性能指标
1. **整体性能**：三种病原体组的 Essential Agreement（EA）和 Categorical Agreement（CA）均超过90%标准。其中，非金黄色葡萄球菌组的EA达97.8%，CA为98.1%；金黄色葡萄球菌组的EA为99.6%，CA为98.6%；肠球菌组的EA为96.3%，CA为94.9%。
2. **误差类型分布**：主要误差集中在 Minor Errors（mE），整体mE率控制在10%以内。Very Major Errors（VME）仅出现1例（犬氯霉素测试），未达到可接受阈值（≥3%为不合格）。
3. **方法局限性**：部分抗生素因测试范围不匹配或方法学差异导致性能波动。例如：
- **氯霉素**：Vitek-2 Compact无法检测低浓度（≤2 μg/mL）的敏感结果，所有测试菌株被误判为耐药。
- **多西环素**：因测试范围上限不足（仅至16 μg/mL），无法准确报告部分高MIC值菌株。
- **氟喹诺酮类**：犬用Enrofloxacin和猫用Marbofloxacin的测试范围与临床实际需求存在偏差。

### 核心问题与解决方案
1. **β-内酰胺酶检测**：
- 研究发现，直接测试法（未诱导）易漏检β-内酰胺酶阳性菌株，尤其是耐青霉素的葡萄球菌。通过诱导硝普盐试验（诱导菌落生长后测试），可将假阴性率从40%降至0%。
- 例如，5株S. pseudintermedius被Sensititre误判为敏感（MIC≤0.06 μg/mL），但经诱导硝普盐测试后确认为产酶耐药株，Vitek-2 Compact的耐药判定亦被证实为正确。

2. **替代测试策略**：
- 针对葡萄球菌的β-内酰胺类抗生素（如阿莫西林克拉维酸钾、头孢类），采用氧化酶替代法（以苯唑西林为标准）可避免原方法存在的 calling range（测试范围）不匹配问题。实验显示，替代策略使CA达到100%。
- 研究强调，若设备未更新至支持完整 breakpoints（如人用或跨物种标准），需强制执行替代验证流程。

3. **质量控制的适应性调整**：
- 由于Sensititre COMPGP1F的QC流程与常规BMD存在差异（转移体积10 μL vs. 30 μL），研究采用等效QC方法（相同体积转移）并验证其有效性，确保结果可比性。

### 现存挑战与改进建议
1. **临床breakpoints的兼容性问题**：
- 犬用氯霉素 breakpoints（≤2/4/≥8 μg/mL）与人用标准（≤8/16/≥32 μg/mL）存在量级差异，导致相同MIC值可能产生不同interpretation（如犬氯霉素≤2 μg/mL被判定为敏感，但若按人用标准则需≥32 μg/mL才判定为敏感）。这种差异使跨物种数据对比困难，建议建立统一 breakpoints框架。

2. **测试面板的更新需求**：
- 现有Vitek-2 Compact AST-GP81卡缺少部分关键抗生素（如万古霉素）和兽医特异性抗生素（如氟苯尼考），导致无法全面评估耐药性。建议厂商增加：
- **更新测试范围**：如将多西环素上限扩展至≥64 μg/mL以覆盖部分耐药菌株。
- **整合替代测试**：内置β-内酰胺酶诱导检测模块，减少实验室操作复杂度。
- **增加兽用抗生素条目**：如头孢他啶-阿维巴坦、氟达拉索等兽医常用药物。

3. **方法验证的标准化**：
- 研究采用《临床微生物学操作手册》标准流程，但指出该手册未涵盖兽医实验室特有的资源限制（如缺乏定制化参考菌株）。建议：
- **建立兽医专用验证协议**：例如调整QC频率（从每日改为每周）、开发本地化误差数据库。
- **开发跨物种参考面板**：整合人用与兽用抗生素的耐药性标准，解决数据不可比问题。

### 跨领域应用价值
1. **One Health协同效应**：
- 通过验证Vitek-2 Compact在犬猫葡萄球菌和肠球菌中的稳定性，为人类与兽医数据共享奠定基础。例如，肠球菌对氯霉素的耐药率在犬猫中与人之间存在显著差异（人类敏感率＞90%，犬猫＞80%），需在报告中明确物种差异。

2. **资源受限实验室的适用性**：
- 研究采用常规设备（冻存菌种、常规培养皿）和现有QC菌株，验证了Vitek-2 Compact在小规模实验室的可行性。建议厂商提供低成本QC套件（如一次性使用质控卡）以适配资源有限环境。

3. **数据可比性提升**：
- 通过统一使用人类临床breakpoints（如头孢泊肟≤2 μg/mL），可使兽医实验室与人类医疗机构的数据直接关联。研究建议CLSI/VET01S委员会应制定跨物种 breakpoints优先级清单。

### 结论
Vitek-2 Compact在犬猫主要病原体的AST测试中表现出良好一致性，但需针对特定抗生素和breakpoints进行优化。建议实验室采取以下措施：
- **常规流程**：对所有β-内酰胺类抗生素结果进行诱导硝普盐确认。
- **设备更新**：等待厂商推出兼容兽医与人类breakpoints的AST-GP81升级版（如AST-GP82）。
- **数据报告**：在One Health系统中明确标注物种来源和breakpoints版本（如"基于VET01S 7th edition"）。

该研究为兽医实验室AST方法验证提供了标准化操作框架，同时揭示了跨物种数据整合的技术瓶颈，对推动全球抗生素耐药性监测网络的统一具有重要参考价值。后续研究应着重开发兽医专用AST参考面板，并建立动态更新的breakpoints数据库。