长链非编码RNA RERE-AS1调控乳腺癌免疫微环境及免疫治疗应答的作用与机制研究

《Cancer Immunology, Immunotherapy》：RERE-AS1 as a regulator of immune modulation and therapeutic response in breast cancer

本研究针对乳腺癌免疫治疗应答率低的临床难题，系统探讨了lncRNA RERE-AS1在乳腺癌中的表达特征、生物学功能及免疫调控机制。通过TCGA数据库分析、RNA-FISH、体外细胞实验和体内人源化小鼠模型等多层次验证，发现RERE-AS1在乳腺癌组织中显著低表达，其高表达与良好预后正相关；功能上RERE-AS1可抑制肿瘤细胞增殖、迁移并诱导凋亡，同时通过增强免疫细胞浸润（如CD8+T细胞、NK细胞）和促进IFN-γ、TNF-α分泌，重塑肿瘤免疫微环境，提高抗PD-1治疗敏感性。该研究为乳腺癌免疫治疗提供了新的生物标志物和潜在靶点。

　　

乳腺癌是全球女性中最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率居高不下，给患者家庭和社会带来沉重负担。尽管近年来乳腺癌的诊断和治疗取得了显著进展，但晚期患者的5年生存率仍不足20%，尤其是免疫检查点抑制剂在乳腺癌治疗中的应答率有限，这促使研究人员深入探索影响乳腺癌免疫微环境调控的关键分子机制。

在这项发表于《Cancer Immunology, Immunotherapy》的研究中，Shaohui Jiang、Weijie He、Zhimin Li等作者聚焦于长链非编码RNA（lncRNA）RERE-AS1，系统揭示了其在乳腺癌发生发展及免疫调控中的关键作用。研究人员通过整合生物信息学分析、临床样本验证、细胞功能实验以及人源化小鼠模型，首次阐明RERE-AS1作为一个潜在的肿瘤抑制因子，通过调控细胞增殖、凋亡以及免疫细胞浸润，影响乳腺癌的进展和治疗应答。

在研究方法上，作者主要运用了以下几个关键技术路径：首先，基于TCGA和GTEx数据库的转录组数据分析RERE-AS1在乳腺癌及多种癌症中的表达模式；其次，通过RNA荧光原位杂交（FISH）在临床组织样本中验证其表达与定位；第三，利用CRISPR/Cas9基因编辑技术和慢病毒干扰系统在MCF-7和T47D细胞系中构建RERE-AS1过表达与敲低模型，进而通过CCK-8、Transwell、流式细胞术等功能实验评估其对细胞表型的影响；第四，建立乳腺癌细胞与免疫细胞（如NK细胞、巨噬细胞等）的共培养体系，结合ELISA、LDH释放实验分析免疫细胞毒性及细胞因子分泌；最后，在人工免疫系统重建的NSG?-SGM3小鼠模型中评估RERE-AS1对肿瘤生长及抗PD-1疗法响应的影响。

RERE-AS1表达模式分析

研究显示，RERE-AS1在乳腺癌组织中的表达显著低于正常组织，这一趋势在TCGA和GTEx数据库以及112对配对样本中均得到验证。RNA-FISH结果进一步证实其在癌细胞中信号减弱，提示其可能作为抑癌分子发挥作用。

RERE-AS1表达与临床特征的相关性

RERE-AS1低表达与肿瘤T分期晚、病理分期高、HER2阳性等不良临床特征显著相关。生存分析表明，RERE-AS1高表达组患者的总生存期（OS）、无进展生存期（PFS）和疾病特异性生存期（DSS）均显著延长，且在多变量Cox回归模型中其表达水平是独立预后因素。

功能富集分析

GO和GSEA分析提示，RERE-AS1参与RNA剪接过程，且其共表达基因显著富集于适应性免疫应答、抗原结合、B细胞活化等免疫相关通路，预示其在免疫调节中扮演重要角色。

免疫浸润分析

ssGSEA和ESTIMATE算法显示，RERE-AS1高表达组中CD8⁺T细胞、活化树突状细胞（aDCs）、B细胞等免疫细胞浸润水平更高，免疫评分和基质评分也显著上升，说明其与“热”肿瘤免疫微环境密切相关。

细胞功能实验

在MCF-7和T47D细胞中，过表达RERE-AS1可抑制细胞增殖、迁移和侵袭，诱导G0/G1期阻滞和凋亡，上调E-钙黏蛋白（E-cadherin）、Bax等蛋白表达，而下调N-钙黏蛋白（N-cadherin）、MMP2、细胞周期蛋白（Cyclin A1、B1、D2）等。

免疫共培养与动物实验

共培养体系中，RERE-AS1过表达促进免疫细胞向肿瘤区域的迁移，增强LDH释放及IFN-γ、TNF-α分泌，降低IL-10水平，并增加NK细胞、M1型巨噬细胞等效应免疫细胞比例。在小鼠模型中，RERE-AS1过表达联合抗PD-1治疗显著抑制肿瘤生长，降低Ki-67表达，增强凋亡，表明其可提高免疫治疗的敏感性。

综上所述，该研究首次系统阐释了lncRNA RERE-AS1在乳腺癌中作为肿瘤抑制因子及免疫调节剂的双重功能。其低表达与肿瘤恶性进展和免疫逃逸相关，而恢复其表达则能抑制肿瘤生长、增强免疫细胞杀伤能力，并显著提升免疫检查点抑制剂的疗效。这一发现不仅为乳腺癌预后评估提供了新的生物标志物，也为联合免疫治疗策略的开发提供了理论依据和潜在靶点，具有重要的临床转化价值。