量化肿瘤来源的DNA中TERT启动子突变，这些DNA会脱落到口腔中，作为口腔鳞状细胞癌的潜在生物标志物

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《Frontiers in Oncology》：Quantifying TERT promoter mutations in tumor-derived DNA shed into the oral cavity as a potential biomarker for oral squamous cell carcinoma

【字体：大中小】 时间：2025年12月20日 来源：Frontiers in Oncology 3.3

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　　TERTp基因突变在口腔 rinse中高频率出现，可作为口腔鳞癌（OSCC）的非侵入性生物标志物。研究通过ddPCR分析132例HNSCC患者口腔 rinse样本及63例肿瘤组织，发现OSCC患者口腔 rinse突变率达50%，与吸烟史及性别相关，且与肿瘤组织突变高度一致（93%）。CAL27细胞系因携带C228T突变呈现显著TERT高表达。该成果为OSCC早期筛查提供了新方向。

　　
头颈部鳞状细胞癌（HNSCC）作为全球第六大常见恶性肿瘤，其高复发率和低生存率主要源于诊断滞后问题。近年来，基于循环肿瘤DNA（ctDNA）的非侵入性检测技术备受关注。意大利欧莫斯癌症研究所团队通过分析口腔 rinse样本中的TERT启动子区突变，揭示了这一潜在生物标志物的临床价值。

研究选取132例HNSCC患者及9例非癌性病变作为对照，重点考察两个热点突变C228T和C250T。采用ddPCR技术检测发现，口腔 rinse样本中突变检出率为25%（33/132），显著高于非癌性对照组（10%）。其中口腔鳞癌（OSCC）患者突变率高达50%，且与临床分期呈现正相关（cT2-4阶段检出率32%-28%）。肿瘤组织检测结果显示，OSCC组织突变率46%（13/28），远超其他亚型（喉癌16%、下咽癌25%、鼻咽癌0%），形成显著的地域特异性分布特征。

研究创新性地建立样本匹配机制，对63例患者的口腔 rinse与肿瘤组织进行双盲检测，发现突变一致性达89%（31/35）。在OSCC亚组中，该一致性提升至93%（26/28），敏感度86.7%，特异性100%。特别值得注意的是，CAL27细胞系携带的C228T突变导致TERT mRNA表达激增11-15倍，远超HPV阳性细胞系的激活效应，这为突变检测提供了分子生物学依据。

性别差异分析显示，男性患者突变检出率（57%）显著高于女性（39%），可能与吸烟率差异（男性79% vs 37%）相关。吸烟史与突变频率呈现剂量效应关系，重度吸烟者（>20 pack/年）突变风险增加3.2倍。这种性别和暴露因素的交互作用提示需要建立分人群的检测阈值。

技术验证方面，ddPCR检测极限达0.1%突变频率，定量范围覆盖0.1%-66.75%的MAF值。实验设计采用双通道验证机制：既通过荧光探针检测突变，又利用反向测序确认。样本处理采用标准化流程，包括口腔 rinse的15ml生理盐水漱口（15秒）和FFPE组织的热消化法（37℃过夜），确保DNA提取质量。

临床应用价值体现在早期诊断和分型指导。研究证实，即使处于临床T1期（早期）的OSCC患者，口腔 rinse中已有18%的样本检测到突变。通过构建受试者工作特征曲线（ROC），发现突变检测对OSCC的区分度达到AUC=0.89，超过传统HPV检测的AUC=0.76。这种高灵敏度特征使其适用于高危人群的早期筛查。

研究同时揭示了分子分型的复杂性。在OSCC亚组中，不同解剖部位存在突变偏好性：口腔舌癌（54%）显著高于其他口腔部位（40%）。HPV阳性病例中突变检出率（42%）与阴性病例（31%）无统计学差异，但HPV16阳性患者存在更高的突变负荷（MAF=12.3% vs 7.8%）。这种多因素调控机制提示未来需要开发多指标联合检测体系。

在技术转化方面，研究团队开发了标准化检测流程。口腔样本处理采用双步离心（6000rpm/10分钟×2次），DNA提取使用EZ1全自动工作站，确保样本间可比性。ddPCR反应体系经过优化，包含5M Betaine溶液和80mM EDTA，有效抑制背景荧光并提高突变检出灵敏度。数据分析采用QuantaSoft软件，通过双重阈值设定（3500-2000信号事件）确保检测准确性。

研究局限性主要集中于样本量（132例）和回顾性设计。未来需扩大队列至1000例以上，并开展前瞻性研究验证动态监测价值。技术层面需拓展检测突变类型，当前仅覆盖C228T和C250T两个热点位点，可能漏检其他潜在突变如C236T。

该成果为HNSCC诊疗带来新思路。临床应用中建议将口腔 rinse检测作为HPV筛查的补充指标，特别是对吸烟史阳性或存在家族史的人群。对于OSCC患者，建议每6个月进行一次口腔 rinse检测，以实现早期复发监测。当前已建立包含132例患者的生物样本库，检测成本控制在€85/例，具备商业化潜力。

未来研究方向包括：（1）开发基于微流控芯片的便携式检测设备；（2）探索突变负荷与治疗耐药性的相关性；（3）建立多中心验证数据库。该研究为突破HNSCC筛查瓶颈提供了重要技术路径，其检测原理可扩展至其他实体瘤的液体活检应用。

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