血浆microRNA和趋化因子作为肝移植排斥反应的生物标志物：评分验证与组织相关性研究

《Scientific Reports》：Plasma microRNAs and chemokines as biomarkers for rejection in liver transplantation with score verification and tissue correlation

本研究针对肝移植后T细胞介导排斥反应（TCMR）的无创诊断难题，通过前瞻性队列分析151例受者的血浆microRNA（miR-155-5p/miR-181a-5p等）和趋化因子（CXCL-9/10/11），首次证实循环miRNA与肝组织表达水平显著相关（miR-155-5p升高3.3倍，p<0.001）。建立的生物标志物评分系统在独立队列中展现出卓越的预测（AUROC=0.95）和诊断（AUROC=0.99）性能，可有效区分排斥与CMV感染/胆道狭窄，为移植后监测提供了高精度无创工具。

　　

肝移植是终末期肝病和特定阶段肝细胞癌的唯一根治手段，但移植后高达15-34%的患者会遭遇T细胞介导的排斥反应（TCMR）。目前诊断金标准肝活检具有侵入性且存在采样误差，而常规肝功能检查（LFTs）又难以区分排斥与胆道狭窄、病毒感染等并发症。尤其在前6个月免疫抑制剂调整期，缺乏精准的无创监测工具常导致治疗延迟或过度免疫抑制。

为破解这一临床困境，巴塞罗那医院诊所团队在《Scientific Reports》发表最新研究，通过多时间点血浆采样与组织验证相结合的策略，系统性评估了microRNA（miRNA）和趋化因子在TCMR动态监测中的价值。研究首次证实循环miRNA变化能真实反映肝组织免疫状态，并验证了既往开发的生物标志物评分在独立队列中的稳健性。

研究采用前瞻性队列设计（151例肝移植受者），在术后1年内定期采集血浆样本。通过ELISA检测趋化因子（CXCL-9/10/11）浓度，RT-qPCR分析6种miRNA（miR-155-5p、-122-5p、-181a-5p、-194-5p、-483-3p、-885-5p）表达，并对27例肝活检组织（9例正常/18例TCMR）进行miRNA组织相关性分析。采用线性混合效应模型（LMM）处理纵向数据，通过受试者工作特征曲线（AUROC）评估诊断效能。

3.1 研究患者和移植物功能障碍事件

59例（39.1%）出现移植物功能障碍（GD）的患者接受肝活检后，确诊40例（26.5%）发生TCMR，其中72%发生于移植后2周内。与无排斥组相比，TCMR组肝细胞癌（HCC）移植指征比例更高（55% vs. 28.8%, p=0.004），而巨细胞病毒（CMV）感染率更低（7.5% vs. 23.4%, p=0.03）。

3.2 组织miRNA表达

肝组织分析显示，TCMR患者miR-155-5p和miR-122-5p表达分别显著升高3.3倍（p<0.001）和2.3倍（p<0.001），而miR-181a-5p虽呈现1.3倍升高但未达统计学差异（p=0.304）。这一发现首次从组织层面验证了循环miRNA的生物来源可靠性。

3.3 血浆miRNA表达

在排斥发生前及发生时，所有核心miRNA（155-5p、122-5p、181a-5p）均出现显著升高（29.6倍、26.3倍、10.6倍，p均<0.001）。值得注意的是，3例经历两次TCMR的患者显示miRNA水平随排斥事件呈现"升高-恢复正常-再升高"的动态模式。新增的miR-885-5p在LMM分析中仍保持显著差异（p=0.003），而miR-194-5p和miR-483-3p的预测价值有限。

3.4 血浆CXCL-9、CXCL-10和CXCL-11产生

三种趋化因子在TCMR诊断时均显著上升（CXCL-10：5.6倍；CXCL-9：3.3倍；CXCL-11：2.3倍，p均<0.001）。但CXCL-10在CMV感染时亦呈现3.5倍升高，提示单一指标特异性不足。

3.5 生物标志物性能和TCMR预测诊断评分

核心miRNA（155-5p、122-5p、181a-5p）的诊断AUROC（0.98-0.99）显著优于常规LFTs（0.72-0.87）。由miR-155-5p、miR-181a-5p和CXCL-10构成的评分系统表现尤为突出：诊断AUROC达0.99（灵敏度100%，特异度99.1%），预测AUROC为0.95。该评分能有效区分TCMR与胆道狭窄（p<0.001）和CMV感染（p<0.001），克服了单一趋化因子在病毒感染中的假阳性问题。

3.6 接受肝活检患者的生物标志物性能

在59例接受肝活检的GD患者亚组中，虽然他克莫司（TAC）谷浓度在TCMR组更低（5.9 vs. 9.1 ng/mL, p=0.01），但miR-155-5p和miR-181a-5p能100%识别所有排斥事件，显著优于新增miRNA标志物。

本研究通过组织-循环双向验证，确立了miR-155-5p和miR-122-5p作为TCMR特异性生物标志物的病理生理基础。尽管新增生物标志物（miR-885-5p、CXCL-9/11）单独显示潜力，但并未增强原有三联评分效能，反映出生物通路的冗余性。评分系统在独立队列中的成功验证，标志着肝移植无创监测向临床转化迈出关键一步。未来需通过多中心试验验证其普适性，但现有检测方法（ELISA+RT-qPCR）的标准化和48小时出报告时效，已具备临床推广可行性。这项研究为建立基于生物标志物的精准免疫抑制方案奠定了坚实基础，有望显著降低移植后侵入性检查频率并优化个体化治疗策略。