免疫亲和法和无抗体同位素稀释质谱法在血浆ProGRP定量中的比较评估

《ANALYTICAL AND BIOANALYTICAL CHEMISTRY》：Comparative evaluation of immunoaffinity and antibody-free isotope dilution mass spectrometry approaches for plasma ProGRP quantification

同位素稀释质谱法（IDMS）通过整合样品前处理消除基质干扰，但不同前处理策略的互换性不明确。本研究建立两种可溯源的IDMS方法（免疫亲和结合法IMS和抗体无关结合法DMS）用于血浆小细胞肺癌标志物ProGRP检测，采用酶解肽NLLGLIEAK及同位素标记物构建内标曲线，实现0.398–13.8 ng/mL范围的高灵敏度检测（RSD：IMS 5.5%/DMS 4.3%）。校正蛋白丢失和酶解效率（IMS 86.84%/DMS 85.48%），结果显示IMS/DMS与临床化学发光法（CLIA）高度一致，但与ELISA相关性差，证实IMS/DMS可作为复杂基质中蛋白生物标志物的参考测量方法。

　　

摘要

同位素稀释质谱（IDMS）是一种用于复杂生物样本中蛋白质生物标志物定量分析的关键技术，通过与样品制备过程的结合来消除基质干扰，从而实现高灵敏度的测量。然而，不同预处理方法之间的互换性尚未得到充分定义。本文建立了两种可追溯的IDMS方法：免疫质谱（IMS）和直接质谱（DMS），这两种方法分别采用了免疫亲和或无抗体预处理技术，用于血浆ProGRP的定量分析。ProGRP是小细胞肺癌的公认生物标志物。通过使用ProGRP的酶解肽NLLGLIEAK及其同位素标记分子建立了内标曲线，以确保定量结果的可追溯性。我们搭建了一个微升级的高效液相色谱-串联质谱平台，能够实现对ProGRP在0.398–13.8 ng/mL范围内的高灵敏度定量。引入了校正因子以消除蛋白质损失和酶消化效率对定量结果的影响，其中IMS的校正因子为86.84%，DMS的校正因子为85.48%。IMS和DMS的相对标准偏差（RSD）分别为5.5%和4.3%。利用ProGRP表达异常高的患者血浆，研究了这些MS方法与两种免疫测定方法之间的可比性。IMS和DMS的结果与临床化学发光免疫测定（CLIA）的结果表现出良好的一致性和相关性，而CLIA与酶联免疫吸附测定（ELISA）的结果相关性较差。本文讨论了影响MS分析和免疫测定定量准确性的因素，揭示了IMS和DMS作为复杂基质中蛋白质生物标志物参考测量方法的潜力。

图形摘要