胃液与粪便样本分子分型在幽门螺杆菌感染及克拉霉素/左氧氟沙星基因型耐药检测中的性能比较研究

《Scientific Reports》：Comparative molecular profiling of Helicobacter pylori infection and antibiotic genotypic resistance in paired gastric mucosa, gastric juice, and stool samples

本研究针对幽门螺杆菌抗生素耐药性上升导致经验性治疗失败率增高的问题，研究人员通过配对胃黏膜、胃液和粪便样本的分子分型比较，发现胃液样本在检测H. pylori感染及克拉霉素(87.1% vs 72.6%)和左氧氟沙星(70.8% vs 61.1%)耐药基因方面均显著优于粪便样本，为内镜检查期间获取可靠耐药谱提供了最小侵入性替代方案。

　　

在全球范围内，幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H. pylori)感染影响着约半数人口，这种革兰阴性杆菌不仅是慢性胃炎和消化性溃疡的主要病因，更是被世界卫生组织列为Ⅰ类致癌物的胃癌明确危险因素。尽管根除治疗可使胃癌发病率降低47%，但日益严峻的抗生素耐药问题正使传统经验性治疗方案陷入困境——在高耐药地区，含克拉霉素方案的成功率已骤降至65-75%，远低于理想水平。这一严峻形势催生了对精准医疗的迫切需求，而实现精准治疗的关键在于获得准确的抗生素敏感性谱。

传统基于胃黏膜活检的培养法或分子检测虽被国际指南推荐，但其侵入性、对专业内镜设备的依赖以及高昂成本限制了临床应用。尤其当首次治疗失败后，重复内镜取材更增加了患者负担。非侵入性方法如尿素呼气试验虽能有效诊断感染，却无法提供耐药信息。在这一背景下，核酸快速检测技术为突破困境带来了曙光：定量PCR(qPCR)能在4-6小时内识别耐药突变，远快于传统培养所需的7-14天。然而，不同样本类型（胃黏膜、胃液、粪便）的检测性能差异尚不明确，特别是胃液这一长期被忽视的样本来源，其潜在价值亟待系统评估。

本研究采用前瞻性诊断一致性研究设计，纳入218例经¹³C/¹⁴C-尿素呼气试验和组织学(Warthin-Starry染色)双重确认的H. pylori感染患者，同步采集配对胃黏膜活检、胃液和粪便样本。关键技术方法包括：标准化样本采集与稳定化处理、商用qPCR试剂盒同步检测ureB基因及克拉霉素(23S rRNA: A2143G, A2143C, A2144G)和左氧氟沙星(gyrA: 261A, 261G, 260T, 271A, 271T, 272G)耐药突变、以胃黏膜为金标准的性能比较（敏感性/特异性/预测值/Kappa一致性）。

检测H. pylori感染的qPCR性能

胃液展现出显著优势：阳性检出率达95.4%（208/218），敏感性97.6%（95% CI 94.6-99.1），均高于粪便的90.4%和91.3%（P=0.003）。胃液与金标准的一致性（kappa=0.476）明显优于粪便（kappa=0.025），ROC曲线下面积（AUC=0.738）也显著更大（P<0.001）。这一结果凸显胃液在避免假阴性方面的可靠性。

qPCR抗生素耐药基因分析

对于克拉霉素耐药，胃液检测率（57.3%）高于粪便（50.5%），敏感性显著优势（87.1% vs 72.6%, P=0.001），且与胃黏膜一致性达中等强度（kappa=0.691 vs 0.504, P=0.004）。左氧氟沙星耐药检测同样显示胃液更优敏感性（70.8% vs 61.1%, P=0.049），两者特异性均高于92%。胃液更高的阴性预测值（NPV）尤其具有临床意义，可更可靠地排除耐药可能性。

讨论部分深入剖析了胃液优越性的潜在机制：胃液直接来源于胃腔，汇集了全胃黏膜脱落的细胞与细菌，避免了粪便样本经历的肠道降解、PCR抑制物干扰等问题。这一特性使其更能反映胃内H. pylori群体的真实耐药谱，特别在治疗后细菌载量低、分布不均的情况下更具优势。研究同时指出，尽管粪便样本性能稍逊，但其高特异性（>79.6%）意味着阳性结果具有高可信度，在无法进行内镜的场景下仍具应用价值。

该研究的创新性在于首次系统比较了三种配对样本的检测性能，明确了胃液在耐药谱分析中的优越地位。胃液采样可与诊断性内镜同步完成，无需额外侵入性操作，为精准治疗提供了高质量备份或替代方案。对于需重复监测的患者，未来甚至可考虑通过鼻胃管取材，避免重复内镜。然而，研究也存在一定局限：未进行培养法药敏试验（表型金标准）的直接对比，限制了基因型-表型关联的临床解读；单中心设计可能影响结果普适性；仅纳入初治患者，对再治疗人群的适用性待验证。

结论强调，胃液样本在H. pylori感染及克拉霉素/左氧氟沙星耐药基因检测中表现出优于粪便的一致性，特别在克拉霉素耐药分析方面差异显著。这一发现为内镜期间同步完成诊断与耐药谱分析提供了实践依据，有望推动精准医疗在H. pylori管理中的落地。未来研究需重点验证基因型结果与临床治疗结局的关联，进一步确立其临床应用价值。