靶向NUPR1的单域抗体通过诱导早衰和铁死亡抑制三阴性乳腺癌进展

《Cell Death & Disease》：Targeting intrinsically disordered nuclear protein 1 (NUPR1) with single-domain antibodies alleviates triple-negative breast cancer (TNBC) progression in vivo

本研究针对三阴性乳腺癌缺乏有效靶向治疗的临床难题，开发了基于isPLA-seq的高通量筛选平台，成功获得靶向 intrinsically disordered nuclear protein 1 (NUPR1) 的功能性单域抗体sdAb#07.81。该抗体可有效降解NUPR1蛋白，在体外和体内实验中均显著抑制TNBC进展，其作用机制涉及诱导 premature senescence 和 derepress ferroptosis。该研究为TNBC治疗提供了新型靶向策略，并建立了针对细胞内无序蛋白的抗体开发平台。

　　

在乳腺癌的诸多亚型中，三阴性乳腺癌（TNBC）因其侵袭性强、易转移且缺乏有效靶向治疗手段而成为临床治疗的难点。与激素受体阳性或HER2阳性乳腺癌不同，TNBC患者无法从内分泌治疗或HER2靶向治疗中获益，化疗仍是其主要治疗选择。然而，化疗耐药和肿瘤复发等问题严重制约着TNBC患者的长期生存。近年来研究发现，核蛋白1（NUPR1）作为一种应激诱导的无序蛋白，在肿瘤进展、治疗抵抗和不良预后中发挥关键作用，成为TNBC治疗的新兴靶点。

针对这一临床需求，杭州师范大学医学院马振义团队在《Cell Death & Disease》发表最新研究，开发了一套整合原位邻近连接测序（isPLA-seq）、NanoBiT分析和C-degron降解验证的高通量筛选平台，成功获得靶向NUPR1的功能性单域抗体sdAb#07.81。该抗体不仅能够特异性结合并降解NUPR1蛋白，还能在体外和体内实验中显著抑制TNBC进展，其作用机制涉及诱导细胞早衰和解除铁死亡抑制。

研究团队采用的主要技术方法包括：通过人TNBC组织芯片进行免疫组化分析验证NUPR1表达；建立isPLA-seq-NanoBiT-C-degron三级筛选体系筛选单域抗体；利用表面等离子共振（SPR）和GST pull-down验证结合活性；通过细胞活力检测（CCK-8）、早衰标志物（GLB1）染色和脂质过氧化（C11-BODIPY）分析评估功能效应；在免疫健全BALB/c小鼠4T1细胞移植瘤模型中进行体内药效评价；采用RNA测序进行转录组学机制探索。

研究结果方面，通过系列实验证实：

1. 1.
   NUPR1在TNBC组织中显著高表达且与不良预后相关
2. 2.
   成功筛选获得具有强结合活性的sdAb#07.81，能够有效降解内源性NUPR1
3. 3.
   sdAb#07.81在多种TNBC细胞系中显著抑制细胞增殖和球体形成能力
4. 4.
   动物实验证实sdAb#07.81能够显著抑制肿瘤生长，降低Ki67阳性率
5. 5.
   机制研究表明sdAb#07.81通过诱导早衰和激活铁死亡发挥抗肿瘤作用
6. 6.
   转录组分析显示sdAb#07.81处理后DNA修复、mTORC1信号、MYC靶标等通路显著下调

本研究成功建立了功能性单域抗体的高效筛选平台，并验证了sdAb#07.81作为TNBC治疗候选药物的潜力。该抗体通过靶向降解NUPR1，同时激活早衰和铁死亡两条通路，克服了传统单靶点策略的局限性。更重要的是，该研究为靶向细胞内无序蛋白提供了新技术路线，为开发针对"不可成药"靶点的抗体药物开辟了新方向。未来通过进一步临床前研究和联合用药探索，sdAb#07.81有望为TNBC患者提供新的治疗选择，同时该平台技术也可推广至其他难治性疾病的靶向治疗开发。