在自动止血分析仪上，使用三种激动剂建立血小板聚集测试的参考区间

血小板聚集试验参考区间研究 | 采用CN6000和CS5100全自动分析仪，通过非参数法（CLSI EP28-A3c）建立胶原（2/5μg/mL）、肾上腺素（5μmol/L）和瑞斯托菌素（1.2/0.6mg/mL）诱导的MA%参考区间，样本量130名健康志愿者，发现两分析仪间存在显著差异，性别和年龄无显著影响。

　　
该研究旨在建立使用Sysmex CN6000和CS5100两种全自动凝血分析仪测定健康人群胶原蛋白（COL）、肾上腺素（EPI）和瑞斯托菌素（RIS）诱导的血小板聚集最大速率（MA%）的参考区间（RIs）。研究通过招募130名健康志愿者，采用非参数统计方法，依据CLSI EP28-A3c指南确定RIs，并评估分析仪间差异及性别、年龄的影响。

**研究背景与意义**
血小板聚集功能检测对诊断遗传性或获得性血小板功能障碍及监测抗血小板治疗至关重要。传统光传播聚集ometry（LTA）作为“金标准”存在操作繁琐、耗时长的局限性。近年来全自动凝血分析仪（如Sysmex CN/CS系列）通过减少人工操作误差、实现批量检测、缩短报告时间等优势，逐渐成为替代方案。然而，此前关于ADP和花生四烯酸（AA）诱导聚集的RIs已有部分研究，但针对COL、EPI和RIS的自动化检测RIs仍存在空白。本研究首次系统建立这三类诱导剂的MA%参考区间，填补全自动分析仪在非ADP/AA激动剂检测中的标准化数据缺失问题。

**研究方法**
1. **样本选择**：纳入2023年11月至2024年3月期间的健康志愿者，排除妊娠、药物使用、近期手术或感染史者。最终纳入130人（男女各半），年龄18-66岁，分为四组：18-29岁（27.7%）、30-39岁（25.4%）、40-49岁（22.3%）、≥50岁（24.6%）。
2. **仪器与试剂**：使用Sysmex CN6000和CS5100分析仪，配套试剂由厂商提供（批号：COL-FB1632，EPI-FA2269，RIS-FB1689）。根据国际血栓与止血学会（ISTH）及CLSI H58指南设置agonist浓度：COL（2/5 μg/mL）、EPI（5 μmol/L）、RIS（1.2/0.6 mg/mL）。
3. **检测流程**：晨空腹采血，抗凝处理后分离富血小板血浆（PRP）和贫血小板血浆（PPP）。通过添加agonist后测量光密度变化计算MA%。重复检测验证CV%（变异系数）。
4. **统计分析**：采用CLSI EP28-A3c推荐的非参数方法，通过Harris-Boyd Z检验评估性别和年龄分组必要性，Kruskal-Wallis检验比较不同agonist浓度间差异，Wilcoxon符号秩检验分析分析仪间差异。

**关键研究结果**
1. **MA%参考区间**
- **COL（2/5 μg/mL）**：CN6000下为83.4%-97.5%和82.0%-96.9%；CS5100下为76.3%-94.4%和77.1%-95.7%。
- **EPI（5 μmol/L）**：CN6000为76.0%-94.6%，CS5100为70.2%-93.5%。
- **RIS（1.2/0.6 mg/mL）**：CN6000为77.8%-95.0%，CS5100为76.4%-91.3%；0.6 mg/mL浓度下MA%均接近于零（CN6000为0%，CS5100为0%-3.8%）。
*注：所有CV%均低于6.5%，满足厂商要求（≤20%）*

2. **人群特征影响**
- 性别差异：Harris-Boyd Z检验显示男女MA%无显著差异（Z值均<1.5，p>0.05）。
- 年龄差异：各年龄组MA%在CN6000和CS5100下均无统计学差异（p>0.05），故未建立分年龄/性别的RIs。

3. **分析仪性能对比**
- 同一agonist浓度下，CN6000与CS5100的MA%存在显著差异（Z值-1.2至-1.21，p<0.05），平均偏差-2.44%至-3.27%。
- CN6000在RIS 0.6 mg/mL检测中MA%全部为0，而CS5100显示0%-3.8%范围，可能与仪器检测阈值或软件算法差异有关。

**讨论与临床价值**
1. **方法学创新**
- 首次同时使用CN6000和CS5100建立COL、EPI、RIS的RIs，为全自动检测提供标准化参考。
- 采用非参数方法（2.5%-97.5%百分位）替代传统正态分布假设，更适用于非对称数据分布（如MA%在低agonist浓度下可能呈现偏态）。

2. **结果对比与一致性验证**
- COL和RIS（1.2 mg/mL）的RIs与Platton S等（2020）研究基本一致，但EPI（5 μmol/L）的RIs（CN6000：76%-95%，CS5100：70%-94%）显著低于Stratmann团队（2018）报告的3%-104%范围，可能与样本量（130 vs 42）或检测系统差异有关。
- RIS 0.6 mg/mL检测中，CN6000未记录任何聚集反应（MA%=0），而CS5100显示0%-3.8%，提示需结合仪器特性解读结果，尤其在诊断型2B型vWD时需注意阈值差异。

3. **局限性分析**
- 样本年龄范围（20-66岁）缺乏儿童及老年人数据，需后续扩展。
- CS5100的Lag时间和Vmax数据缺失，可能影响动态参数评估。
- 仅使用单一试剂批号，未考虑试剂批次间差异（需参照CLSI EP26指南复验证实）。

4. **临床应用建议**
- 检测前需验证仪器系统（如CV%），建议结合实验室现有设备选择适配的RIs。
- RIS 0.6 mg/mL检测对型2B vWD诊断高度特异（MA%≤3%为异常），但需注意不同分析仪的阈值差异。
- 非ADP/AA激动剂检测中，全自动系统的参考数据具有重要临床意义，尤其对常规血液检测实验室可替代部分LTA操作。

**研究展望**
未来需开展多中心研究以验证参考区间的泛化性，并建立不同试剂批号、仪器型号间的换算标准。此外，针对特殊人群（如长期服用抗血小板药物者）的RIs需进一步探索。