《Biochemistry Research International》：Tetrahydrocurcumin (THC) as a Melanogenesis Inhibitor in Melanoma Cell Lines
编辑推荐：
本综述系统评价了四氢姜黄素（THC）在黑色素瘤细胞系（A375、C32）中对黑色素生成的抑制作用。研究表明，THC在浓度高达100 μM时无细胞毒性，能直接抑制酪氨酸酶（Tyrosinase）活性，并下调其蛋白表达。同时，THC通过清除活性氧（ROS）发挥抗氧化作用，有效减少α-MSH（α-melanocyte-stimulating hormone）刺激下的黑色素合成。这些发现揭示了THC作为一种安全、稳定的天然化合物，在皮肤美白和抗氧化护肤产品中具有广阔应用前景。
四氢姜黄素（Tetrahydrocurcumin, THC）作为姜黄素的主要氢化代谢产物，因其稳定的化学性质和无色特性，在化妆品和皮肤病学领域受到广泛关注。本研究旨在探讨THC在黑色素瘤细胞系中对黑色素生成（Melanogenesis）的抑制作用及其相关机制。
1. 引言
黑色素是由黑素细胞合成的天然色素，不仅决定皮肤、毛发和眼睛的颜色，还在保护皮肤免受紫外线（UV）辐射损伤中发挥关键作用。黑色素生成过程受多种酶调控，其中酪氨酸酶（Tyrosinase）是限速酶，催化L-酪氨酸（L-tyrosine）转化为L-DOPA，并进一步氧化为多巴醌（dopaquinone），最终形成黑色素。酪氨酸酶抑制剂已被广泛研究作为皮肤美白剂，但现有制剂如熊果苷（arbutin）、曲酸（kojic acid）和维生素C（vitamin C）存在稳定性差、细胞毒性或生物利用度低等问题。THC作为一种强效抗氧化剂，具有抗炎和清除活性氧（Reactive Oxygen Species, ROS）的能力，且无色素沉着，因此成为替代合成抗氧化剂的理想候选物。
2. 材料与方法
本研究使用人恶性黑色素瘤细胞A375、无色素黑色素瘤细胞C32和人包皮成纤维细胞Hs68，通过MTT法评估细胞增殖，流式细胞术分析细胞周期和凋亡/坏死，测定黑色素含量和酪氨酸酶活性，DCFDA法检测细胞内ROS水平，DPPH法评估自由基清除能力，Western blot分析酪氨酸酶和GSK3β蛋白表达。
3. 结果
3.1. THC对细胞增殖的影响
MTT实验显示，THC在0–100 μM浓度范围内处理1–3天，对A375、C32和Hs68细胞均无细胞毒性，细胞形态未发生显著改变。
3.2. THC不诱导黑色素瘤细胞凋亡
Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术分析表明，THC处理4小时后，细胞凋亡和坏死率无显著增加，证实THC对正常细胞无致死作用。
3.3. THC对细胞周期的影响
流式细胞术DNA含量分析显示，THC处理24小时后，对A375、C32和Hs68细胞的细胞周期分布无影响。
3.4. THC直接抑制酪氨酸酶活性
体外酪氨酸酶抑制实验表明，THC在12.5–100 μM浓度下显著抑制蘑菇酪氨酸酶活性，且呈剂量依赖性。
3.5. THC降低细胞内ROS水平
DCFDA荧光探针检测发现，THC能剂量依赖性地抑制A375细胞中H2O2诱导的ROS产生，效果与阳性对照N-乙酰-L-半胱氨酸（NAC）相似。
3.6. THC具有自由基清除能力
DPPH自由基清除实验证实，THC能有效清除自由基，其抗氧化活性与维生素C和熊果苷相当。
3.7. THC抑制黑色素生成
在α-MSH刺激的B16F0小鼠黑色素瘤细胞中，THC显著降低黑色素含量，效果优于熊果苷和维生素C。
3.8. THC下调酪氨酸酶蛋白表达
Western blot分析显示，THC处理24小时后，A375细胞中酪氨酸酶蛋白表达水平显著降低，但GSK3β蛋白未被激活。
4. 讨论
本研究发现THC通过双重机制抑制黑色素生成：直接抑制酪氨酸酶活性和下调其蛋白表达，同时通过抗氧化作用减少ROS积累。THC在100 μM浓度下无细胞毒性，不影响细胞周期和凋亡，安全性高。与现有皮肤美白剂相比，THC在较低浓度下即可发挥显著效果，且其无色特性适用于无色化妆品配方。
5. 结论
THC作为一种天然化合物，通过抑制酪氨酸酶活性和表达、清除ROS，有效减少黑色素合成，且无细胞毒性，展现出在皮肤美白和抗氧化护肤产品中的巨大应用潜力。后续研究应聚焦于体内实验和制剂开发，以推动其临床转化。
