《Journal of Clinical Virology》：Long-Term Stability of Dried Blood Spot Samples for HIV Diagnosis in Adults from Kinshasa (Democratic Republic of Congo)
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长期稳定性评估显示，在-80℃储存7年后DBS样本的HIV血清学标志物仍保持高灵敏度和特异性（100%），三种检测方法（ECLIA、ELFA、免疫层析法）间Kappa值达0.90-1.00，Spearman相关系数0.77-0.99。研究证实DBS在HIV诊断和生物样本库应用中具有优异的长期稳定性，ELFA检测值存在显著时间依赖性增加。
Nerea Astiz | Paula Martínez de Aguirre | Silvia Carlos | Samclide Mbikayi | David Barquín | Eduardo Burgue?o | áfrica Holguín | Gabriel Reina
纳瓦拉大学诊所，西班牙纳瓦拉省潘普洛纳市Pío XII 36号，邮编31008
摘要
背景
干血斑（DBS）是一种广泛用于血清学检测的采样方法，尤其是在资源有限的环境中。然而，HIV抗体在干血斑中的长期稳定性尚未得到充分研究。本研究评估了在-80°C条件下储存7年的HIV血清学标志物的稳定性，并比较了三种不同诊断技术（电化学发光免疫测定法（ECLIA）、酶联荧光测定法（ELFA）和免疫层析法的分析性能和一致性。
方法
2016年至2017年间，共在刚果民主共和国金沙萨的Monkole医院收集了143份干血斑样本。每位患者制备了两张干血斑卡片，每张卡片上含有五滴全血。第一张卡片在2017年使用三种HIV诊断方法进行了分析：ECLIA（罗氏公司）、ELFA（bioMerieux公司）和免疫层析法（Geenius公司，BioRad公司）。第二张卡片被储存至2024年，然后再次使用相同的诊断工具进行检测。
结果
储存7年后，干血斑样本中的HIV标志物表现出极佳的稳定性。所有方法的灵敏度和特异性均为100%，除了ECLIA方法出现了一例假阳性结果。2017年和2024年的检测结果之间的一致性很高，Kappa值介于0.90到1.00之间。2017年和2024年的检测结果之间的Spearman相关系数也很强：ECLIA为0.99，ELFA为0.89，免疫层析法为0.77–0.81。2024年ELFA方法的检测值显著增加，但诊断分类结果保持不变。
结论
高灵敏度、高特异性和良好的检测结果一致性支持干血斑在HIV诊断和监测中的长期使用。这些发现对于生物样本库建设和回顾性血清流行病学研究尤为重要。
引言
HIV血清学诊断主要依赖于通过筛查和确认测试来检测抗体和p24抗原[1]。尽管检测技术有所进步，但在高流行率且资源受限的环境中，及时获得可靠的诊断结果仍然受到限制，因为传统的样本采集和运输存在后勤挑战[2]。
干血斑（DBS）作为一种实用替代品，特别是在资源匮乏的环境中，已经得到广泛应用。它们具有多种优势：侵入性小、成本低，以及储存和运输要求简单[3]、[4]、[5]、[6]、[7]。在HIV检测领域，干血斑显示出优异的诊断性能，其灵敏度和特异性分别达到了97.5%和99.6%，属于传染病检测中最高的水平之一[8]。干血斑的应用已超越了低收入国家，有证据表明它们可以通过提高样本可追溯性和减少分析前问题来减少诊断错误[9]、[10]、[11]。
随着干血斑在HIV诊断和监测中的使用日益增多，了解其长期稳定性变得尤为重要[2]、[12]、[13]。虽然干血斑被广泛用于血清学检测和生物样本库建设[3]、[14]，但关于HIV标志物在长期储存条件下的持久性的数据仍然有限。具体来说，目前尚不清楚在-80°C条件下储存多年后，抗体和抗原的检测效果是否仍然稳定。缺乏这些信息，就无法完全保证使用存档的干血斑样本进行回顾性分析的可靠性。
本研究旨在评估在-80°C条件下储存7年的干血斑样本中HIV血清学标志物的稳定性。研究探讨了长期储存对诊断性能的影响，并检查了不同检测方法之间的结果一致性。这些发现将有助于确定长期储存的干血斑是否适合用于HIV血清学分析，并为其在研究和监测中的使用提供基于证据的指导。
研究人群
研究人群
OKAPI项目（金沙萨艾滋病预防观察计划）是一项前瞻性队列研究，研究对象为刚果民主共和国金沙萨市15至59岁的居民，他们前往Monkole医院接受HIV自愿咨询和检测（VCT）服务[15]。在本研究中，通过将毛细血管或静脉血滴在Whatman 903纤维素滤纸上，然后在室温下风干24小时来收集干血斑样本。
结果
共有143份干血斑样本被纳入分析。其中66.7%为女性，中位年龄为40.9岁（四分位数范围[IQR]：31.5–51.4岁）。中位病毒载量（VL）为3.6 log??拷贝/mL（IQR：2.8–4.8），中位CD4+ T淋巴细胞计数为277个/mm3（IQR：184–441）。
讨论
本研究评估了在-80°C条件下储存7年的干血斑样本中HIV血清学标志物的长期稳定性，使用了三种诊断技术：电化学发光免疫测定法（ECLIA）、酶联荧光测定法（ELFA）和免疫层析法。总体而言，样本的反应性没有显著下降，除了ELFA方法的定量结果中观察到了VT信号的显著增加。
伦理批准
本研究遵循《赫尔辛基宣言》的伦理准则，并按照相关指南和规定进行。研究获得了参与机构的人类受试者审查委员会的批准：Monkole/金沙萨大学医院（刚果民主共和国金沙萨）和纳瓦拉大学（西班牙潘普洛纳）。所有参与者均签署了书面知情同意书。
资金支持
本研究得到了西班牙政府（Fondo de Investigación en Salud-FI，项目编号PI16/01908）和纳瓦拉省政府（项目编号045-2015）的资助。
CRediT作者贡献声明
Nerea Astiz：撰写初稿、进行正式分析、提出研究概念。
áfrica Holguín：撰写、审稿与编辑、提出研究概念。
Eduardo Burgue?o：撰写、审稿与编辑、数据管理。
Gabriel Reina：撰写初稿、监督项目、争取资金、进行正式分析、提出研究概念。
Silvia Carlos：撰写、审稿与编辑、项目管理、争取资金、提出研究概念。
Paula Martínez de Aguirre：撰写、审稿与编辑、数据分析。
利益冲突声明
作者声明没有已知的可能影响本文研究结果的财务利益或个人关系。
致谢
我们感谢参与研究的患者，以及负责在金沙萨Monkole医院和Kalembelembe医院收集患者干血斑样本的当地工作人员。同时，我们也感谢Patricia Sanz在实验室处理干血斑样本过程中提供的技术支持。
