《Poultry Science》：Dietary
Lonicerae flos extract ameliorates small intestine damage via activating the Nrf-2 signaling pathway and suppressing endoplasmic reticulum stress in heat stressed broilers
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本研究针对热应激严重损害肉鸡生长性能和肠道健康的问题，探讨了日粮中添加金银花提取物（LFE）的缓解效果。结果表明，LFE（尤其800 mg/kg剂量）能通过激活Nrf-2通路增强空肠抗氧化能力（提升T-AOC、SOD活性），抑制内质网应激（下调GRP78、PERK、IRE1、ATF6、CHOP表达）及细胞凋亡，并改善紧密连接蛋白（Occludin、Claudin-1、ZO-1）表达，从而修复肠道屏障、降低血清D-乳酸和AST水平。该研究为LFE作为绿色饲料添加剂缓解热应激提供了理论依据，对保障畜禽健康生产具有重要意义。
随着全球气候变暖，极端高温天气频发，给集约化养殖业带来了严峻挑战。肉鸡由于全身覆盖羽毛、汗腺不发达，体温调节能力有限，成为热应激的“重灾区”。热应激会导致肉鸡采食量下降、生长性能受损、免疫力降低，甚至死亡率升高，造成巨大的经济损失。其中，小肠是热应激的主要靶器官。在热应激状态下，肉鸡为了散热会使体表血管扩张、内脏血管收缩，导致肠道血流量减少，引发缺血缺氧性损伤。这种损伤会破坏肠道屏障的完整性，增加肠道通透性，使得肠道内的有害物质和病原菌更容易进入血液循环，引发全身性炎症，进一步加剧机体损伤。因此，如何有效缓解热应激对肉鸡肠道健康的损害，是当前畜牧业可持续发展面临的关键问题。
在此背景下，植物提取物因其天然、低残留的优势，成为缓解热应激的研究热点。金银花（Lonicerae flos）作为一种传统中药，以其“清热”功效闻名，其主要活性成分绿原酸（Chlorogenic acid）已被证实具有强大的抗氧化、抗炎和屏障保护活性。先前的研究表明，金银花提取物（Lonicerae flos extract, LFE）能够改善氧化损伤并增强紧密连接蛋白的表达，但其在热应激肉鸡空肠损伤中的具体保护机制尚不完全清楚。为了填补这一空白，商丘师范学院动物科学系的马冰冰、石传鑫等研究人员在《Poultry Science》上发表了他们的最新研究成果，系统探讨了日粮添加LFE对热应激肉鸡空肠的保护作用及潜在机制。他们假设LFE可能通过激活核因子E2相关因子2（Nrf-2）等保护性信号通路，减轻内质网应激（Endoplasmic Reticulum Stress, ERS）和细胞凋亡，进而改善肠道屏障功能。
为了验证这一假设，研究人员设计了一项严谨的动物实验。他们选取了240只28日龄、体重相近的雄性 Arbor Acres 肉鸡，随机分为5个处理组，每组6个重复，每个重复8只鸡。处理组包括：正常对照组（NOR，22°C，基础日粮）、热应激组（HS，32°C，基础日粮）以及三个LFE补充组（在32°C热应激环境下，分别饲喂添加了400、800、1200 mg/kg LFE的基础日粮，记为LFE400、LFE800、LFE1200）。试验为期14天（从28日龄至42日龄）。试验期间，研究人员监测了鸡舍的温湿度指数（Temperature humidity index, THI），确保热应激模型成功建立。
本研究采用的关键技术方法主要包括：生长性能指标（平均日增重ADG、平均日采食量ADFI、料重比F/G）的测定；血清生化指标（天门冬氨酸氨基转移酶AST、丙氨酸氨基转移酶ALT、D-乳酸）的检测；空肠组织形态学（绒毛高度、隐窝深度、绒隐比V/C）的观察与测量；空肠黏膜抗氧化指标（总抗氧化能力T-AOC、超氧化物歧化酶SOD、谷胱甘肽过氧化物酶GSH-Px）的测定；以及实时荧光定量PCR（Real-Time PCR）技术检测空肠黏膜中与Nrf-2通路、内质网应激、细胞凋亡和紧密连接相关的关键基因的mRNA表达水平。所有数据均采用SPSS软件进行统计分析。
生长性能
结果发现，与NOR组相比，热暴露7天和14天后，HS组肉鸡的ADFI和ADG均显著降低，而F/G显著升高。这表明热应激严重损害了肉鸡的生长效率。虽然LFE各剂量组与HS组之间的生长性能无统计学显著性差异，但在热暴露14天后，LFE800组的F/G比HS组降低了8.5%，呈现出改善趋势。这表明LFE可能通过改善肠道健康来部分缓解热应激导致的生长抑制。
血清指标
热应激显著提高了血清AST、ALT活性和D-乳酸水平，表明热应激造成了肝损伤和肠道屏障功能受损。日粮添加LFE，特别是在800 mg/kg剂量下，能够显著缓解热应激引起的血清AST和D-乳酸水平的升高。这说明LFE具有保护肝脏和改善肠道屏障完整性的作用。
空肠发育与组织形态学
热应激对空肠的相对重量和长度没有显著影响，但显著降低了空肠绒毛高度。而LFE补充（特别是LFE800和LFE1200组）显著缓解了热应激导致的绒毛高度降低。绒毛高度的增加意味着吸收表面积的扩大，这从结构上解释了LFE可能改善营养物质吸收的机制。
空肠抗氧化能力
热应激降低了空肠黏膜的T-AOC和SOD活性。LFE补充，尤其是800 mg/kg和1200 mg/kg剂量，能够显著提高T-AOC和SOD活性。这表明LFE增强了空肠组织的抗氧化防御能力。
空肠基因表达
- 1.
Nrf-2通路相关基因：LFE补充，特别是LFE800和LFE1200组，上调了核因子Nrf-2及其下游靶基因血红素加氧酶1（HMOX-1）的mRNA表达，同时下调了其抑制蛋白Keap1的表达。这表明LFE激活了Nrf-2信号通路，这是其增强抗氧化能力的重要分子基础。
- 2.
缺氧诱导因子与内质网应激相关基因：热应激显著上调了缺氧诱导因子1α（HIF-1α）以及内质网应激标志物GRP78、PERK、IRE1、ATF6的mRNA表达。LFE补充则显著抑制了这些基因的表达。这表明热应激导致了肠道缺氧和内质网应激，而LFE能有效缓解这些应激反应。
- 3.
细胞凋亡相关基因：热应激上调了促凋亡基因Caspase-3和CHOP的表达，并下调了抗凋亡基因Bcl-2的表达。LFE补充逆转了这些变化，表明LFE能够抑制热应激诱导的肠上皮细胞凋亡。
- 4.
紧密连接蛋白相关基因：热应激降低了紧密连接蛋白（Occludin、Claudin-1、ZO-1）的mRNA表达。LFE补充，特别是在LFE800和LFE1200组，显著提高了这些基因的表达水平，说明LFE有助于修复和增强肠道屏障功能。
综合讨论与结论，本研究揭示了LFE缓解热应激肉鸡空肠损伤的多靶点作用机制。研究人员提出了一条连贯的病理通路：热应激导致肠道缺血缺氧，引起HIF-1α积累；HIF-1α可能通过干扰细胞能量代谢和钙稳态，引发内质网中未折叠/错误折叠蛋白积聚，从而激活内质网应激（ERS）；持续的内质网应激进而通过CHOP途径触发细胞凋亡，破坏肠道上皮完整性。LFE，其主要活性成分绿原酸，在此过程中发挥了多重保护效应：一方面，它激活Nrf-2通路，增强机体的抗氧化能力，对抗氧化损伤；另一方面，它抑制HIF-1α的表达，进而减轻内质网应激和随之而来的细胞凋亡，并促进紧密连接蛋白的表达，最终共同维护了肠道屏障的结构与功能。
综上所述，本研究表明，日粮中添加金银花提取物（LFE），尤其是800 mg/kg的剂量，能有效缓解热应激对肉鸡生长性能和肠道健康的负面影响。其核心机制在于激活Nrf-2介导的抗氧化防御，抑制HIF-1α/内质网应激依赖的细胞凋亡通路，并增强肠道紧密连接屏障。该研究不仅为理解LFE的生物学功能提供了新的理论见解，也为将LFE开发成为一种绿色、高效的饲料添加剂，应用于缓解家禽热应激、促进畜牧业可持续发展提供了重要的科学依据。未来的研究可进一步探讨LFE对热应激肉鸡肠道微生物群的影响，以更全面地揭示其保护机制。
